【摘 要】
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[目的]AGPase基因可在百合鳞茎膨大发育过程中影响淀粉的合成代谢,从而调控鳞茎发育,构建干扰ACPase基因RNAi载体并遗传转化进行反向下调作用研究,可为该调控机制的研究提供
【机 构】
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华南农业大学林学与风景园林学院,广西农业科学院生物技术研究所,广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(31660560);广西农业科学院基本科研业务专项(桂农科2017YM32);广西南宁市科学研究与技术开发计划项目(20133164)
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[目的]AGPase基因可在百合鳞茎膨大发育过程中影响淀粉的合成代谢,从而调控鳞茎发育,构建干扰ACPase基因RNAi载体并遗传转化进行反向下调作用研究,可为该调控机制的研究提供更多信息。[方法]克隆300 hp的AGPase基因保守序列,利用Gateway技术通过BP反应将该序列插入入门载体pDONR221,进行LR反应将该序列正反向插入干扰载体PJawoh18-RNAi中,经过酶切鉴定所构建RNAi载体的正确性;并通过农杆菌介导法转入百合组培苗中,PCR检测RNAi载体转化农杆菌,荧光定量PCR检测农杆菌转化植株的ACPase相对表达量变化。[结果]成功构建pDONR221-AGPase入门克隆与pJawoh18-RNAi-AGPase表达载体,遗传转化百合愈伤诱导出AGPase表达量下调的转化植株。[结论]采用Gateway技术可方便构建RNAi表达载体,选择的AGPase保守序列能作为干扰片段对百合AGPase自身转录的mRNA进行下调。
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