目的:建立快速、灵敏的高效液相色谱串联质谱电喷雾法测定大鼠血清中尼洛替尼的浓度,并进行大鼠尼洛替尼胶囊的药动学研究。方法:以XDB C₁₈色谱柱分离,采用电喷雾离子源（ESI源）;以维拉帕米为内标,血清样品经乙腈沉淀蛋白后,以甲醇（含0.1%甲酸）:水（含0.1%甲酸）=50:50为流动相,流速为0.35 ml·min^-1。以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测,监测离子对分别是m/z 530.2→289.1（尼洛替尼）和内标m/z 455.3→165（维拉帕米）。结果:血清中尼洛替尼的线性范围在5～2000 ng·ml^-1良好。尼洛替尼在大鼠体内的主要药动学参数.AUC_0-24、C_max、t_max、t_1/2z、CLz/F分别为（10 055.37±1 405.49）ng·h·ml^-1、（1273.56±329.49）ng·ml^-1、（6.17±3.37）h、（1.86±1.04）h、（2.01±0.27）L·h^-1·kg^-1。结论:本试验建立的分析方法专属性好,灵敏度高,准确快捷,适用于尼洛替尼大鼠血清生物样品的快速检测。