【摘 要】
：
目的构建可溶性的人纤溶酶原Kringle 5(K5)突变体GST-K5M5基因,并在单位体积的原核系统中获得高表达、高纯度、可水溶的融合GST-K5M5蛋白粉针剂。方法 K5M5突变体基因(模板已
【机 构】
：
中山大学中山医学院生物化学教研室; 热带病防治研究教育部重点实验室; 海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室;
【基金项目】
：
科技部新药创制重大专项(2013ZX09102-053);国家自然科学基金(30971208,30973449,81172163,81272515,81272338);(教育部)高等学校博士学科点专项科研基金(20100171110049,201201171110053);广东省自然科学基金(10251008901000009,S2012010009250);广东省科技计划项目(2011B03
论文部分内容阅读
目的构建可溶性的人纤溶酶原Kringle 5(K5)突变体GST-K5M5基因,并在单位体积的原核系统中获得高表达、高纯度、可水溶的融合GST-K5M5蛋白粉针剂。方法 K5M5突变体基因(模板已经对K5N端5个带负电的酸性氨基酸进行中性氨基酸丝氨酸的中性突变),通过PCR从本实验室保存的pET22b(+)/K5mut5 cDNA模板中扩增得到,再克隆到pGEX-4T-1/BL21(DE3)原核表达系统中。用自动诱导培养系统诱导其表达,提高产量。通过GST树脂亲和层析柱分离,双蒸水透析纯化,再制成冻干粉剂保存。结果该重组GST-K5M5蛋白的分子量为37000Mr,通过SDS-PAGE和Western-blot可以检测到其存在。冻干粉复溶的GST-K5M5呈剂量依赖抑制内皮细胞的增殖。结论在以前的研究基础上设计并用自动诱导培养的方法在大肠杆菌中表达纯化出了GST-K5M5融合蛋白,得到的GST-K5M5蛋白产量高、纯度高、可溶性好、生物学效应强,且方法简便、经济,为工业大规模发酵提供了基本参数。
其他文献
目的了解北京市东城区居民对最健康水、自来水是否安全、饮水关注方面认知现状,掌握居民饮用水知识获取渠道,为正确开展饮用水知识健康宣教提供科学依据。方法于2013年6—8月
<正>"乐观"是一种积极的性格特征、生活态度。乐观的人有这样的特点:无论在什么情况下,即使事情再差也会保持良好的心态,并且坚信坏事情总会过去,阳光总会再来。从心理学角度
以飞机预冷气引起口为典型构件,对其成型工艺进行探索,选择RTM成型工艺并应用PAM-RTM软件对RTM成型工艺影响参数进行虚拟仿真,确定模具设计的最终参数值。
唯物史观揭示了人类社会发生、发展的客观规律,有其独特的民族视角。在梳理民族政治学作为一门学科得以形成的基础上,本文试图讨论唯物史观视野中的民族政治学研究,挖掘唯物
目的:观察针灸联合桂枝加葛根汤治疗神经根型颈椎病的临床疗效。方法:将82例符合诊断标准的神经根型颈椎病患者随机分为治疗组和对照组,每组各41例。治疗组采用针灸联合桂枝
文章将深圳证券交易所与19世纪末、20世纪初设计的荷兰阿姆斯特丹贝尔拉格证券交易所相联系,从城市公共空间、景观设计、建筑外立面与灯光设计、室内设计、建筑使用者以及未
大学是探究学术、培养人才的场所。信任是大学师生学术交往的前提和基础,是师生在长期学术交流过程中所拥有的一种学术认同。以课堂教学为例,当前影响大学师生信任关系的重要
【目的】对美系杜洛克三元杂交猪与台系杜洛克三元杂交猪的胴体性状和肉质性状进行准确评估,并分析不同杂交组合、性别对胴体及肉质性状的影响。【方法】共选取同一批次杜洛
<正> 1.踢网足球幼儿一手提着装有足球的网袋,一脚支持地面,以另一脚踢网足球,反复进行(图一)。提示:踢球的接触点可以在脚内侧、脚外侧、脚背,反复换支持脚。2.踢挂球将网足