【摘 要】
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以牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG.SDS-PAGE和We
【机 构】
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华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,武汉,430070华中农业大学预防兽医学湖北省重点实验室,华中农业大学动物医学院,武汉,430070;中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所,北京,100029
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以牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG.SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性.包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法.应用该方法与进口试剂盒(IDEXX)平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%(351/380).对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRV gG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性.对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%～41.5%.
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