【摘 要】
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目的 建立一种快速高效地定量评价重组人Neuritin（rhNeuritin）蛋白生物学活性的新方法。方法 首先建立小鼠海马神经元细胞（HT22细胞）维持培养条件。在此条件下，明确rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间。根据11组不同浓度梯度的rhNeuritin蛋白对HT22细胞存活的影响，建立标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活的量效关系曲线；并确定rhNeuri
【基金项目】
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国家科技重大专项（民口）重大新药创制项目（2019ZX09301-161）； 浙江省重点研发项目（2019C03060）；
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目的 建立一种快速高效地定量评价重组人Neuritin（rhNeuritin）蛋白生物学活性的新方法。方法 首先建立小鼠海马神经元细胞（HT22细胞）维持培养条件。在此条件下，明确rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间。根据11组不同浓度梯度的rhNeuritin蛋白对HT22细胞存活的影响，建立标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活的量效关系曲线；并确定rhNeuritin蛋白的检测范围。在rhNeuritin蛋白的检测限内，根据标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活之间的量效关系的拟合曲线，制订标准品蛋白的活性单位，建立了针对rhNeuritin蛋白生物学活性的评价体系。利用两批测试品rhNeuritin蛋白，对该方法的重复性和准确性进行了验证。结果 HT22细胞的维持培养液的浓度为0.4%FBS,rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间为72 h, rhNeuritin蛋白浓度在62.5～1 000 ng·mL-1的检测限内，HT22细胞的存活与rhNeuritin蛋白的浓度呈正相关。在rhNeuritin蛋白的检测线内，拟定标准品的EC50为一个活性单位。两组测试品rhNeuritin蛋白的量效关系曲线与标准品呈现相同趋势，3者R~2均大于0.9,说明该方法的重复性很好。通过拟订的标准品的活性单位，计算得到500 ng·mL-1时测试品1和测试品2的活性单位分别为1.059、1.069,而实验实际测得测试品1和测试品2的活性单位分别为1.074和1.088,与测定的活性单位相比，两组测试品计算得到的活性单位的误差小于2%,说明该实验方法具有较好的准确性。结论 成功建立了重组人Neuritin蛋白的定量检测方法，并制定了明确的活性单位。
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