【摘 要】
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目的构建EGFP融合表达第二线粒体源的半胱氨酸激活物(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac)基因的真核表达质粒。方法提取He La细胞总RNA,逆转录合成c D
【机 构】
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吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(NSFC31070670)
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目的构建EGFP融合表达第二线粒体源的半胱氨酸激活物(second mitochondria-derived activator of caspases,Smac)基因的真核表达质粒。方法提取He La细胞总RNA,逆转录合成c DNA,以其为模板,PCR扩增Smac基因,将其插入到p EGFP-N3质粒中,构建重组真核表达质粒p EGFP-N3-Smac,通过脂质体法转染He La细胞,于倒置荧光显微镜下观察转染后质粒在细胞中的分布表达情况,并采用Western blot法鉴定表达的融合蛋白Smac-EGFP。结果成功构建了真核表达质粒p EGFP-N3-Smac,转染后的He La细胞在细胞内膜周围即线粒体部位可见明显、规律的GFP表达;表达的融合蛋白Smac-EGFP相对分子质量约49 000。结论成功构建了重组真核表达质粒p EGFP-N3-Smac,并在He La细胞中表达了融合蛋白,为进一步研究Smac的功能提供了参考。
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