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摘要：建立了液相色谱-串联三重四极杆质谱法（LC-MS/MS）同步检测海参中的甲氰菊酯和扑草净。样品用乙腈提取，中性氧化铝柱净化，LC-MS/MS分析，基质标准曲线定量。结果表明，甲氰菊酯和扑草净在0～50ng/mL范围内呈良好线性，相关系数均在0.999以上，方法检出限为1.0μg/kg，定量限为5.0μg/kg。在5.0μg·kg-1、10μg·kg-1、50μg·kg-1添加水平下，甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之间，扑草净平均回收率在86%～92%之间，RSD均小于10%。该方法操作简单，分析速度快，可适用于海参中的甲氰菊酯和扑草净同时测定。
关键词：液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）;海参;甲氰菊酯;扑草净
甲氰菊酯别名灭扫利，是一种广谱拟除虫菊酯类杀螨杀虫剂，中等毒性，广泛用于棉花、水果、蔬菜和茶叶等多种经济作物;扑草净主要作用于大豆、花生、棉花、水稻、甘蔗等作物，防除禾本科杂草和阔叶杂草，中等毒性。两种农药均不得在水产养殖中使用。海参池塘养殖过程中易受到病虫和大型藻类的危害[1-2]，有些养殖户非法使用甲氰菊酯和扑草净杀虫灭藻。目前食品中的甲氰菊酯和扑草净检测标准为气相色谱-质谱法[3-5]，气相色谱-质谱法前处理繁琐，分析时间长，且单四极杆受试剂空白干扰大，对低浓度的样品定性定量造成困扰。
本方法建立了液相色谱-串联质谱法分析海参中的甲氰菊酯和扑草净，前处理简单，分析速度快，抗干扰能力强，可以对两种农药同时进行定性和定量，极大提高了检测速度，减少了检测差错率。
1实验部分
1.1仪器、试剂与材料
LC-20AD液相色谱仪（日本岛津）、QTRAP4500三重四极杆质谱仪（美国ABSCIEX）、百分之一电子天平（赛多利斯）、平行蒸发仪（瑞士BUQI）、TDZ5-WS离心机（湖南湘仪）、MS3涡旋混合器（IKA）、JYS-A8000绞肉机（九阳）。
甲氰菊酯：1000μg/mL（正己烷）;扑草净：1000μg/mL（丙酮），均为北京北方伟业计量技术研究院生产。
乙腈和甲醇（HPLCGrade，Merck）、中性氧化铝柱：1000mg/6mL（DIKMA）、甲酸（HPLCGrade，DIKMA）、0.2μm滤膜（PALL），实验所用水为超纯水。
1.2试样制备
海参去内脏后切成小块后混匀，绞肉机绞碎，装入洁净容器中，密封，-20℃保存。
1.3样品前处理
称取5.00g样品（精确到0.01g）于50mL离心管中，加入10mL乙腈，3000r/min涡旋混匀2min，4000r/min离心5min，上清液移入25mL比色管中;残渣中再加入10mL乙腈，3000r/min涡旋混匀2min，超声5min，4000r/min离心5min，上清液合并至25mL比色管中，乙腈定容至25.0mL，混匀备用。
中性氧化铝柱5mL乙腈活化后，准确移取5.00mL提取液至中性氧化铝柱上，流出液接入蒸发管中，5mL乙腈洗涤中性氧化铝柱，收集全部流出液。45℃蒸发至干。准确加入2.00mL乙腈+水（1+1）洗涤蒸发管内壁，经0.2μm滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱分析。
1.4液相色谱-串联质谱条件
液相色谱条件：色谱柱AccucoreTMaQ（100mm×2.1mm，2.6μm），柱温40℃，流速0.5mL/min，进样量5μL，流动相A为0.005mol/L乙酸铵溶液（含0.3%甲酸），B为甲醇;梯度洗脱程序：0～1min，10%B;1～3min，10%B～90%B;3～5min，90%B;5～5.1min，90%B～10%B;5.1～7min，10%B。
质谱条件：电喷雾离子源（ESI），多反应扫描（MRM）正离子模式，喷雾电压5500V，气帘气30PSi，碰撞气Medium;温度550℃;雾化气：55PSi;辅助加热气：55PSi。质谱条件及参数见表1。
1.5标準曲线配制
取甲氰菊酯和扑草净的标准溶液各100μL于同一进样小瓶中，氮气吹干溶剂后，准确加入1mL乙腈，混匀，为100μg/mL标准溶液，用空白基质逐级稀释成0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10，25，50ng/mL的标准系列。
2结果与讨论
2.1质谱条件的确定
分别取1μg/mL的甲氰菊酯和扑草净溶液通过蠕动泵注入质谱中，寻找母离子、子离子和碰撞能，并优化去簇电压和碰撞池出口电压。甲氰菊酯的一级质谱图显示其加NH+4离子m/z367.1信号比其本身母离子m/z350信号强，并由实验结果进行了证实。因此本文选用m/z367.1作为甲氰菊酯的母离子进行分析。
2.2基质效应
以基质标准曲线与溶剂标准曲线的斜率比值来评定基质效应，标准曲线见表2;甲氰菊酯的基质效应为59.6%，扑草净的基质效应为74.5%，二者均表现为基质抑制，其中甲氰菊酯基质抑制更明显。因此选用基质标准曲线进行定量。
2.3线性范围
以浓度为横坐标，定量离子峰面积为纵坐标绘制标准曲线，甲氰菊酯和扑草净基质标准曲线在0～50ng/mL范围内均呈现良好线性关系，线性系数r>0.999。甲氰菊酯和扑草净基质标准溶液的多反应扫描质量色谱图见图1。
2.4回收率和精密度
通过空白样品添加标准物质的方式进行回收率和精密度测试，添加梯度为1.0、5.0、10、50μg·kg-1，回收率和精密度见表3和表4。由表中数据可知，在5.0～50μg·kg-1添加范围内，甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之间，RSD在5.1%～9.0%之间;扑草净平均回收率在86.6%～92.4%之间，RSD在3.5%～6.9%之间。
2.5检出限和定量限
通过分析表3和表4中的回收率和RSD值，甲氰菊酯和扑草净的检出限可定为1.0μg·kg-1，定量限可定为5.0μg·kg-1。
2.6实际样品检测
检测实际样品38份，检测结果与气相色谱-质谱法一致。
3结论
本方法建立了液相色谱-串联质谱法同时检测海参中的甲氰菊酯和扑草净。前处理操作简单，可操作性强，分析速度快，准确度和精密度满足检测方法学的要求，可作为海参中甲氰菊酯和扑草净的定性、定量检测方法。
参考文献：
[1]
孙爱丽.海参养殖池塘中几种大型藻类的危害及其防治措施[J].水产养殖，2014（5）：28-29.
[2]房英春，张慧，陈曦.海参养殖常见病害的诊治[J].中国水产，2008（1）：70-71.
[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中甲氰菊酯残留量检测方法：SN/T2233-2008[S].北京：中国标准出版社，2009：1-17.
[4]中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员.动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定：GB/T5009.162-2008[S].北京：中国标准出版社，2009：1-16.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中扑草净残留量检测方法气相色谱-质谱法：SN/T1968-2007[S].北京：中国标准出版社，2008：1-6.
（收稿日期：2021-05-07）
关键词：液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）;海参;甲氰菊酯;扑草净
甲氰菊酯别名灭扫利，是一种广谱拟除虫菊酯类杀螨杀虫剂，中等毒性，广泛用于棉花、水果、蔬菜和茶叶等多种经济作物;扑草净主要作用于大豆、花生、棉花、水稻、甘蔗等作物，防除禾本科杂草和阔叶杂草，中等毒性。两种农药均不得在水产养殖中使用。海参池塘养殖过程中易受到病虫和大型藻类的危害[1-2]，有些养殖户非法使用甲氰菊酯和扑草净杀虫灭藻。目前食品中的甲氰菊酯和扑草净检测标准为气相色谱-质谱法[3-5]，气相色谱-质谱法前处理繁琐，分析时间长，且单四极杆受试剂空白干扰大，对低浓度的样品定性定量造成困扰。
本方法建立了液相色谱-串联质谱法分析海参中的甲氰菊酯和扑草净，前处理简单，分析速度快，抗干扰能力强，可以对两种农药同时进行定性和定量，极大提高了检测速度，减少了检测差错率。
1实验部分
1.1仪器、试剂与材料
LC-20AD液相色谱仪（日本岛津）、QTRAP4500三重四极杆质谱仪（美国ABSCIEX）、百分之一电子天平（赛多利斯）、平行蒸发仪（瑞士BUQI）、TDZ5-WS离心机（湖南湘仪）、MS3涡旋混合器（IKA）、JYS-A8000绞肉机（九阳）。
甲氰菊酯：1000μg/mL（正己烷）;扑草净：1000μg/mL（丙酮），均为北京北方伟业计量技术研究院生产。
乙腈和甲醇（HPLCGrade，Merck）、中性氧化铝柱：1000mg/6mL（DIKMA）、甲酸（HPLCGrade，DIKMA）、0.2μm滤膜（PALL），实验所用水为超纯水。
1.2试样制备
海参去内脏后切成小块后混匀，绞肉机绞碎，装入洁净容器中，密封，-20℃保存。
1.3样品前处理
称取5.00g样品（精确到0.01g）于50mL离心管中，加入10mL乙腈，3000r/min涡旋混匀2min，4000r/min离心5min，上清液移入25mL比色管中;残渣中再加入10mL乙腈，3000r/min涡旋混匀2min，超声5min，4000r/min离心5min，上清液合并至25mL比色管中，乙腈定容至25.0mL，混匀备用。
中性氧化铝柱5mL乙腈活化后，准确移取5.00mL提取液至中性氧化铝柱上，流出液接入蒸发管中，5mL乙腈洗涤中性氧化铝柱，收集全部流出液。45℃蒸发至干。准确加入2.00mL乙腈+水（1+1）洗涤蒸发管内壁，经0.2μm滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱分析。
1.4液相色谱-串联质谱条件
液相色谱条件：色谱柱AccucoreTMaQ（100mm×2.1mm，2.6μm），柱温40℃，流速0.5mL/min，进样量5μL，流动相A为0.005mol/L乙酸铵溶液（含0.3%甲酸），B为甲醇;梯度洗脱程序：0～1min，10%B;1～3min，10%B～90%B;3～5min，90%B;5～5.1min，90%B～10%B;5.1～7min，10%B。
质谱条件：电喷雾离子源（ESI），多反应扫描（MRM）正离子模式，喷雾电压5500V，气帘气30PSi，碰撞气Medium;温度550℃;雾化气：55PSi;辅助加热气：55PSi。质谱条件及参数见表1。
1.5标準曲线配制
取甲氰菊酯和扑草净的标准溶液各100μL于同一进样小瓶中，氮气吹干溶剂后，准确加入1mL乙腈，混匀，为100μg/mL标准溶液，用空白基质逐级稀释成0.1，0.5，1.0，2.0，5.0，10，25，50ng/mL的标准系列。
2结果与讨论
2.1质谱条件的确定
分别取1μg/mL的甲氰菊酯和扑草净溶液通过蠕动泵注入质谱中，寻找母离子、子离子和碰撞能，并优化去簇电压和碰撞池出口电压。甲氰菊酯的一级质谱图显示其加NH+4离子m/z367.1信号比其本身母离子m/z350信号强，并由实验结果进行了证实。因此本文选用m/z367.1作为甲氰菊酯的母离子进行分析。
2.2基质效应
以基质标准曲线与溶剂标准曲线的斜率比值来评定基质效应，标准曲线见表2;甲氰菊酯的基质效应为59.6%，扑草净的基质效应为74.5%，二者均表现为基质抑制，其中甲氰菊酯基质抑制更明显。因此选用基质标准曲线进行定量。
2.3线性范围
以浓度为横坐标，定量离子峰面积为纵坐标绘制标准曲线，甲氰菊酯和扑草净基质标准曲线在0～50ng/mL范围内均呈现良好线性关系，线性系数r>0.999。甲氰菊酯和扑草净基质标准溶液的多反应扫描质量色谱图见图1。
2.4回收率和精密度
通过空白样品添加标准物质的方式进行回收率和精密度测试，添加梯度为1.0、5.0、10、50μg·kg-1，回收率和精密度见表3和表4。由表中数据可知，在5.0～50μg·kg-1添加范围内，甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之间，RSD在5.1%～9.0%之间;扑草净平均回收率在86.6%～92.4%之间，RSD在3.5%～6.9%之间。
2.5检出限和定量限
通过分析表3和表4中的回收率和RSD值，甲氰菊酯和扑草净的检出限可定为1.0μg·kg-1，定量限可定为5.0μg·kg-1。
2.6实际样品检测
检测实际样品38份，检测结果与气相色谱-质谱法一致。
3结论
本方法建立了液相色谱-串联质谱法同时检测海参中的甲氰菊酯和扑草净。前处理操作简单，可操作性强，分析速度快，准确度和精密度满足检测方法学的要求，可作为海参中甲氰菊酯和扑草净的定性、定量检测方法。
参考文献：
[1]
孙爱丽.海参养殖池塘中几种大型藻类的危害及其防治措施[J].水产养殖，2014（5）：28-29.
[2]房英春，张慧，陈曦.海参养殖常见病害的诊治[J].中国水产，2008（1）：70-71.
[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中甲氰菊酯残留量检测方法：SN/T2233-2008[S].北京：中国标准出版社，2009：1-17.
[4]中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员.动物性食品中有机氯农药和拟除虫菊酯农药多组分残留量的测定：GB/T5009.162-2008[S].北京：中国标准出版社，2009：1-16.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.进出口食品中扑草净残留量检测方法气相色谱-质谱法：SN/T1968-2007[S].北京：中国标准出版社，2008：1-6.
（收稿日期：2021-05-07）