目的:通过以未修饰的原型蛋白为对照品,建立准确测定多种聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)中蛋白含量的通用型方法。方法:采用rhGH国家对照品和凝胶色谱法测定PEG-rhGH中的蛋白含量。通过详细的专属性、精密度、准确性等方法学考察,建立该方法。色谱条件:采用TSKGel 3000SWxl(300 mm×7.8mm)凝胶色谱柱,以0.05 mol·L-1的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠(pH7.0)为流动相,流速为0.6 mL·min-1,柱温为室温,检测波长为280 nm。通过将测定结果与申报企业原有方法测定结果进行比对,对现有含量测定方法进行评价。结果:由于PEG与蛋白质之间的连接子存在双键,在214 nm下,3种PEG-rhGH的测定结果的准确性较差,平均回收率(n=9)分别为109.3%、109.9%、110.6%;而在280 nm下,rhGH在200~1800μg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9999),3种PEG-rhGH的平均回收率(n=9)分别为101.2%、101.7%、100.4%。结果比对中发现,新建方法与企业申报方法中采用同质对照品的HPLC法测定结果相当,但与以BSA为对照品的Lowry法测定结果相差较大。结论:本方法专属性、精密度和准确性良好,可作为多种PEG-rhGH含量测定的通用型方法。