【摘 要】
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目的 分析骨关节炎(OA)与正常人关节软骨细胞差异表达蛋白质图谱,筛选与OA相关的蛋白质并探讨其功能.方法 培养OA和正常人关节软骨细胞(OAC和NAC),蛋白质组学比较和筛选OAC和
【机 构】
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200940,上海市第一人民医院宝山分院骨科武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科;
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目的 分析骨关节炎(OA)与正常人关节软骨细胞差异表达蛋白质图谱,筛选与OA相关的蛋白质并探讨其功能.方法 培养OA和正常人关节软骨细胞(OAC和NAC),蛋白质组学比较和筛选OAC和NAC蛋白质表达的差异.构建高迁移率族蛋白1(HMGB1) RNA干扰的真核表达载体Pgenesil-1/HMGB1小干扰RNA(siRNA)转染至OAC中,酶联免疫吸附法(ELISA法)检测转染后OAC上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达.结果 体外培养OAC和NAC呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色出现紫色异染颗粒.蛋白质组学研究获得6个在OAC中表达上调的蛋白,分别参与细胞骨架构成、转录调控、胶原合成和物质代谢等过程.成功构建siRNA表达载体Pgenesil-1/HMGB1 siRNA,转染OAC后高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白含量(0.14±0.03)明显低于对照组(Pgenesil-1/OAC:0.52±0.04,P＜0.05)和空白组(OAC:0.49±0.07,P＜0.05),Pgenesil-1/HMGB1 siRNA/OAC上清液中IL-1β和TNF-α[(25.23±11.39)、(287.36±118.36) ng/L]明显低于Pgenesil-1/OAC[(63.23±5.38)、(655.00±49.27) ng/L]和OAC[(69.71±6.76)、(591.94±75.89) ng/L],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HMGB1与OA密切相关,下调HMGB1基因,能够明显抑制软骨细胞IL-1β和TNF-α的表达.
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