【摘 要】
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水通道蛋白(AQP)序列中的两个天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸序列(NPA motif)是水通道蛋白家族中高度保守的特征性序列,其晶体结构研究显示,两个NPA motifs位于通道中心的狭窄部位,
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水通道蛋白(AQP)序列中的两个天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸序列(NPA motif)是水通道蛋白家族中高度保守的特征性序列,其晶体结构研究显示,两个NPA motifs位于通道中心的狭窄部位,直接参与水分子的结合和选择性通过.为了进一步研究两个NPA motifs在水通道蛋白结构、功能和生源学(biogenesis)方面的重要性,通过点突变方法分别获得单独缺失NPA1或NPA2 motif以及同时缺失两个NPA motifs的3种水通道AQP1基因突变型.将3种AQP1突变cDNA分别亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,建立稳定转染3种AQP1基因突变型的CHO细胞系.AQP1免疫荧光分析显示,3种AQP1突变蛋白均能正常表达并定位于质膜,显示AQP1蛋白质表达和细胞内加工过程未受NPA motifs缺失的影响.分别对表达3种AQP1突变蛋白的CHO细胞进行质膜水通透性功能分析,并与表达野生型AQP1的CHO细胞进行比较,结果显示,缺失NPA1或NPA2引起AQP1转水功能下降49.6%和 46.7%,而同时缺失两个NPA motifs的AQP1转水功能与野生型AQP1相似.上述结果显示,水通道AQP1中的NPA motifs在AQP1转水功能中发挥重要作用,但对于AQP1蛋白的表达、细胞内加工和通道基本结构的形成并不起关键作用.
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