【摘 要】
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【目的】克隆啤酒酵母鲨烯合酶基因及构建其基因表达载体,为在微生物体内重建青蒿素合成途径打下基础。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩增、扩增片段与T-载体连接和克隆片段的
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(编目:30672614),广东省科技计划项目(编号:20078031404008),广州中医药大学创新基金项目(编号:K0060037)
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【目的】克隆啤酒酵母鲨烯合酶基因及构建其基因表达载体,为在微生物体内重建青蒿素合成途径打下基础。【方法】采用聚合酶链反应(PCR)扩增、扩增片段与T-载体连接和克隆片段的序列分析;酶切并回收目的基因,反向插入酵母表达载体pGAPZctA,双酶切鉴定重组子。【结果】通过PCR扩增获得1335bp片段,克隆后经PCR和酶切反应进行了鉴定。初步测序结果与GenBank上已登录的酵母鲨烯合酶基因序列基本吻合,相差仅数个碱基对;将此片段反向插入酵母表达载体pGAPZctA,构建了反义酵母表达载体,并通过双酶切加以鉴
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