黄芩素和LY294002对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响研究

来源 :中国全科医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zongbangsheng
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目的探讨黄芩素和LY294002对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法 2015年3月—2016年1月,取人肝癌细胞系SMMC-7721,制备细胞悬液。加入黄芩素(1、2、5、10、20、50、100、200、300μmol/L,分别命名为A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9组)或LY294002(1、2、5、10、20、30μmol/L,分别命名为B1、B2、B3、B4、B5、B6组),设定空白对照组和二甲基亚砜(DMSO)对照组,采用CCK8试剂盒检测各组细胞增殖水平;采用20μmol/L黄芩素(C1组)单独处理,20μmol/L黄芩素联合10μmol/L LY294002(C2组)处理人肝癌细胞系SMMC-7721,设定空白对照组和DMSO组,采用流式细胞术检测各组细胞周期;采用2、5、10、20μmol/L黄芩素(分别命名为D1、D2、D3、D4组)处理人肝癌细胞系SMMC-7721,设定空白对照组和DMSO组,采用显微摄影检测各组细胞数量;采用20μmol/L黄芩素(E1组)单独处理,20μmol/L黄芩素联合10μmol/L LY294002(E2组)处理人肝癌细胞系SMMC-7721,设定空白对照组和DMSO组,采用流式细胞术检测各组早期凋亡和晚期凋亡情况;采用20μmol/L黄芩素(F1组)、10μmol/L LY294002(F2组)或20μmol/L黄芩素联合10μmol/L LY294002(F3组)处理人肝癌细胞系SMMC-7721,设定空白对照组和DMSO组,采用实时荧光定量PCR(Realtime PCR)法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、周期素D1(Cyclin D1)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)mRNA表达水平;采用20μmol/L黄芩素(G1组)、10μmol/L LY294002(G2组)或20μmol/L黄芩素联合10μmol/L LY294002(G3组)处理人肝癌细胞系SMMC-7721,设定空白对照组和DMSO组,采用Western blotting法检测磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)、Cyclin D1、磷酸化GSK-3β(P-GSK-3β)、磷酸化AKT(P-AKT)表达水平。结果 A8组、A9组、B6组细胞增殖水平低于空白对照组、DMSO对照组(P<0.05)。C2组G0/G1期、G2/M期细胞比例高于空白对照组、DMSO组,S期细胞比例低于空白对照组、DMSO组(P<0.05)。D4组细胞数量少于空白对照组、DMSO组(P<0.05)。空白对照组、DMSO组、E1组、E2组早期凋亡和晚期凋亡比较,差异无统计学意义(P>0.05)。F3组ERK1/2、Cyclin D1、GSK-3β、AKT mRNA表达水平均低于空白对照组、DMSO组(P<0.05)。G3组P-ERK1/2、Cyclin D1、P-GSK-3β、P-AKT表达水平低于空白对照组、DMSO组(P<0.05)。结论黄芩素和LY294002可抑制人肝癌细胞系SMMC-7721细胞增殖,但不影响其凋亡。
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