MICA-α3和NKG2D蛋白的表达及其抗体结合功能检测

来源 :国际生物制品学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的

重组表达人MHC Ⅰ类链相关蛋白A α3结构域(MHCⅠchain related protein A α3 domain,MICA-α3)蛋白及自然杀伤细胞受体2D(natural killer group 2D,NKG2D)蛋白,制备抗MICA-α3单克隆抗体,并检测其结合功能。

方法

构建MICA-α3及NKG2D蛋白表达载体,经转化大肠埃希菌BL21菌株表达重组蛋白,通过分子筛、组氨酸标签蛋白层析纯化。用重组MICA-α3蛋白免疫小鼠,采用杂交瘤技术筛选单克隆抗体,用细胞ELISA检测单克隆抗体功能。

结果

重组蛋白在大肠埃希菌BL21菌株中以包涵体形式表达。筛选得到5株能和表达MICA-α3的MDA-MB-453细胞结合的单克隆抗体,且不影响MDA-MB-453细胞与NKG2D结合。

结论

制备的抗MICA-α3单克隆抗体能与肿瘤细胞结合,同时不影响肿瘤细胞与NKG2D结合。

其他文献
期刊
期刊
期刊
疫苗是预防和控制传染病最经济、有效的手段,疫苗接种是通过诱导机体产生保护性免疫应答来预防和控制人类和动物疾病的常规方法。面对当今重大、复杂、突发、高变病原体,传统疫苗学方法难以满足需求,新型疫苗技术是应对未来全球健康挑战的有利武器。未来疫苗技术要着眼于更合理、更精准和更高效,保证安全性的同时,最大程度提高疫苗效力。此文梳理了目前疫苗技术的研究进展,并指出了未来的发展趋势,有利于提升对未知病原体的探索和主动防御的共识,促进创新性疫苗技术体系的发展。
当前新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情仍在全球大流行,确诊病例和死亡人数仍不断攀升,如何有效控制病毒的传播,降低传染率和死亡率是目前全人类亟待解决的问题。一方面需要快速、可靠、经济的检测方法及时发现新型冠状病毒(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2,SARS-CoV-2)感染者,另一方面需要寻找新颖、有效的COVID-19治疗及预防策略。各种基于成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(clusteredregularlyinterspacedshort
目的利用仓鼠模型探究新型冠状病毒(severeacuterespiratorysyndromecoronavirus2,SARS-CoV-2)感染后是否存在抗体依赖性感染增强(antibodydependentenhancement,ADE)现象,为疫苗研发和接种提供实验依据。方法实验室构建SARS-CoV-2感染仓鼠模型,分成对照组、感染组、二次感染组、免疫组,ELISA法检测仓鼠血清总抗体以及细胞因子IL-6和转化生长因子-β含量;中和试验法检测仓鼠血清病毒中和抗体;免疫印迹法和定量逆转录PCR检测仓
目的构建并鉴定表达新型冠状病毒核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白的基因重组BCG。方法利用PCR技术从质粒pUC57-N(Kan 抗性)中获得新型冠状病毒N蛋白全长基因。将N基因连接到大肠埃希菌-BCG穿梭表达质粒pMV261,进行酶切、PCR及测序鉴定。重组质粒经电转化导入感受态BCG,通过蛋白印迹法鉴定目的基因在重组BCG中的表达。结果经过PCR扩增获得1260bp的N基因,构建的重组表达质粒pMV261-N序列完整,插入的基因片段与美国国家分子生物学信息资源中心报道的新型冠状病毒N蛋白全长基
目的通过Meta分析明确静注人免疫球蛋白(humanimmunoglobulinforintravenousinjection,IVIG)对于新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的疗效和安全性。方法计算机检索Cochrane图书馆、PubMed、中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库自2020年1月1日至2021年7月31日发表的关于IVIG治疗COVID-19的中、英文随机对照试验及队列研究。根据Cochrane系统评价员手册进行质量评价,采用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果共纳入11个
目的采用40层细胞工厂(40-layercellfactory,CF40)工艺培养原代地鼠肾(primaryhamsterkidney,PHK)细胞,优化乙脑减毒活疫苗的生产工艺。方法用不同浓度新生牛血清培养不同接种密度PHK细胞,比较各组PHK细胞数量,确定CF40工艺的PHK细胞接种密度和新生牛血清浓度。通过对比CF40和15L转瓶采用不同新生牛血清的PHK细胞培养情况,比较两种工艺对新生牛血清的选择性。对4个厂家CF40培养的PHK细胞数量进行单因素方差分析,判定对CF40的选择性。结果CF40工艺
目的优化金黄色葡萄球菌α-毒素(α-toxin,AT)溶血活性测定方法,用于无毒突变AT(non-toxicmutantAT,mAT)特异性血清抗体体外功能性评价和中和抗体滴度测定。方法使用AT裂解兔红细胞,释放血红蛋白,通过分光光度法检测溶血活性,并对该方法中的孵育时间、兔红细胞终浓度、TritonX-100浓度进行优化,同时验证方法重复性。对mAT特异性血清抗体进行体外功能性评价,绘制AT溶血曲线,计算AT溶血率50%时的浓度,检测血清半数中和抗体滴度。结果AT溶血活性最适检测条件为:孵育时间90mi