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【摘要】目的探讨T细胞检测在结核病诊断中的应用价值。方法T细胞检测与传统的细菌学检测方法比较分析。结果结核感染T细胞检测在结核病的辅助诊断中远远优于传统的细菌学检测方法[1]。结论结核感染T细胞检测是较灵敏和特异的快速检测结核分枝杆菌感染的方法，可用于结核病的快速诊断。对控制活动性结核的发生与再发生、潜伏性结核感染的预防、儿童结核病的辅助诊断等具有重要意义。
【关键词】T细胞检测；结核病；辅助诊断
中国是结核菌感染高负担国家，患者人数居全球第二[2]。结核病是一种慢性传染性疾病，病原体具有持久性。具体表现为“五多”即感染人数多、患病人数多、潜伏感染人数多、新发患者多、死亡人数多。其传染性、潜伏性、难清除性、再活动性、致病复杂性等防治难点使结核病防治成为首要任务。新发结核病例来自潜伏性结核感染人群，潜伏性结核感染人群数量巨大。新增活动性结核病人每年约145万人。控制活动性结核病人必须通过鉴别“高危人群”“预防性治疗”“免疫接种”来控制潜伏性结核感染。传统的诊断结核病的方法有很多不足，临床实验室最常用的检测手段就是痰标本涂片的抗酸染色、BD-960结核菌的快速培养及传统L-J罗氏培养（罗培）、结核抗体检测等。痰涂片阳性检出率低，结核抗体检测特异性低，敏感度差，BD-960结核菌的快速培养与传统培养方法比较虽然缩短了检测时间，但其阳性检出率受标本采集等众多因素影响仍然不高。应用结核感染T细胞检测技术，可提高结核分枝杆菌的阳性率，24h报告检测结果，为临床疾病的准确快速的诊断提供理论依据。现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1病例来源选取2012年1月——2013年6月在我院就诊的患者。274例确诊病例均为住院病例，其中男182例，女92例，年龄7-85岁，临床症状和影像学诊断均符合结核病的诊断标准。203例疑似病例均为门诊病例，其中男85例，女118例年龄2-92岁，表现为不明原因发热，但临床症状不明显，影像学检查显示正常。
1.2试剂与方法患者的痰标本均采用抗酸染色法，染色液试剂盒由台湾贝索生物技术有限公司提供。患者的痰标本进行L-J罗氏培养（慢培），L-J固体培养基由台湾贝索生物技术有限公司提供。患者的痰标本进行MGIT液体培养基快速培养，MGIT液体培养基由美国BD公司提供。结核感染T细胞检测试剂盒（免疫斑點法）由上海复兴长征医学科学有限公司提供。痰培养标本采集，由患者清晨漱口后，咳出的深部痰放置无菌痰盒内。血样采集抽取足量的外周静脉血，加至含有肝素抗凝剂的采血管中。采集量如下：成年人或10岁以上儿童，8ml静脉血；2-9岁儿童，4ml静脉血；2岁以下儿童，2ml静脉血。
2结果
T细胞检测与痰标本涂片的抗酸染色、BD-960结核菌的快速培养、传统L-J罗氏培养（罗培）比较阳性率和检测时间上有明显的优势，见表1。
3讨论
近年来结核病疫情呈明显上升趋势，全球所有传染性疾病中，结核病已成为成年人的首位死因。对于感染结核的患者进行早期诊断和治疗是改善患者预后的关键，也是控制结核播散的重要环节，但是对于结核杆菌感染初期的检测并不容易。结核菌培养目前仍然是临床上结核病诊断的金标准，但结核菌细菌学检查缺乏敏感性，由于条件限制结核菌培养在许多基层医疗机构难以开展，对菌阴肺结核、无痰患者、儿童结核及肺外结核实验室诊断仍比较困难。肺结核临床表现复杂多变，极易误诊漏诊。传统的临床诊断结核的实验室方法有限。因而，发展能用于诊断结核的快速敏感的实验室技术十分重要。
机体感染结核分枝杆菌后，体内存在特异的效应T淋巴细胞，其在体外再次受到结核菌特异抗原的刺激时，会分泌释放IFN-γ，通过检测IFN-γ的水平或计数分泌IFN-γ的外周血PBMC，可以了解机体在感染结核分枝杆菌后的免疫应答状态，从而发现结核分枝杆菌的潜伏感染，进而辅助诊断结核病。T-SPOT.TB是利用结核特异抗原（ESAT-6CFP-10），通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测受试者，体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断目前该受试者是否感染结核杆菌。
T-spot.TB试验对结核病的早期、快速、准确诊断明显优于PPD试验[3]，是特异性和灵敏度高的结核分枝杆菌辅助诊断试验。其检测样本灵活，创伤性小，可对外周血、胸水、腹水、脑脊液、心包积液等标本进行结核感染T检测。可根据样本类型，进一步结合影像学检查可对肺外结核进行诊断或者是辅助诊断。对于临床症状不明显和影像学检查显示正常者，可通过结核感染T细胞检测对潜伏性结核分枝杆菌感染者进行预防性治疗或观察。对儿童结核病进行辅助诊断，克服了儿童干咳、无痰，（用其它方法几乎无法检测）的弊端等对临床上痊愈的活动性结核病，应用T-spot.TB技术控制其发生与再发生。
参考文献
[1]肖倩，黄旭峰.T-spot.TB试验快速检测结核杆菌感染的临床应用研究[J].实验与检验医学，2009，27（3）：272-274.
[2]白旭华，霍万学.结核杆菌感染T细胞介导免疫应答研究的新进展[J].微生物学杂志，2012，32（1）：75-79.
[3]荣兰香，马淑红，艾清等.T-spot.TB试验与PPD试验对结核病患者诊断价值相关性比较[J].中国实验诊断学，2013，17（8）：1475-1476.
【关键词】T细胞检测；结核病；辅助诊断
中国是结核菌感染高负担国家，患者人数居全球第二[2]。结核病是一种慢性传染性疾病，病原体具有持久性。具体表现为“五多”即感染人数多、患病人数多、潜伏感染人数多、新发患者多、死亡人数多。其传染性、潜伏性、难清除性、再活动性、致病复杂性等防治难点使结核病防治成为首要任务。新发结核病例来自潜伏性结核感染人群，潜伏性结核感染人群数量巨大。新增活动性结核病人每年约145万人。控制活动性结核病人必须通过鉴别“高危人群”“预防性治疗”“免疫接种”来控制潜伏性结核感染。传统的诊断结核病的方法有很多不足，临床实验室最常用的检测手段就是痰标本涂片的抗酸染色、BD-960结核菌的快速培养及传统L-J罗氏培养（罗培）、结核抗体检测等。痰涂片阳性检出率低，结核抗体检测特异性低，敏感度差，BD-960结核菌的快速培养与传统培养方法比较虽然缩短了检测时间，但其阳性检出率受标本采集等众多因素影响仍然不高。应用结核感染T细胞检测技术，可提高结核分枝杆菌的阳性率，24h报告检测结果，为临床疾病的准确快速的诊断提供理论依据。现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1病例来源选取2012年1月——2013年6月在我院就诊的患者。274例确诊病例均为住院病例，其中男182例，女92例，年龄7-85岁，临床症状和影像学诊断均符合结核病的诊断标准。203例疑似病例均为门诊病例，其中男85例，女118例年龄2-92岁，表现为不明原因发热，但临床症状不明显，影像学检查显示正常。
1.2试剂与方法患者的痰标本均采用抗酸染色法，染色液试剂盒由台湾贝索生物技术有限公司提供。患者的痰标本进行L-J罗氏培养（慢培），L-J固体培养基由台湾贝索生物技术有限公司提供。患者的痰标本进行MGIT液体培养基快速培养，MGIT液体培养基由美国BD公司提供。结核感染T细胞检测试剂盒（免疫斑點法）由上海复兴长征医学科学有限公司提供。痰培养标本采集，由患者清晨漱口后，咳出的深部痰放置无菌痰盒内。血样采集抽取足量的外周静脉血，加至含有肝素抗凝剂的采血管中。采集量如下：成年人或10岁以上儿童，8ml静脉血；2-9岁儿童，4ml静脉血；2岁以下儿童，2ml静脉血。
2结果
T细胞检测与痰标本涂片的抗酸染色、BD-960结核菌的快速培养、传统L-J罗氏培养（罗培）比较阳性率和检测时间上有明显的优势，见表1。
3讨论
近年来结核病疫情呈明显上升趋势，全球所有传染性疾病中，结核病已成为成年人的首位死因。对于感染结核的患者进行早期诊断和治疗是改善患者预后的关键，也是控制结核播散的重要环节，但是对于结核杆菌感染初期的检测并不容易。结核菌培养目前仍然是临床上结核病诊断的金标准，但结核菌细菌学检查缺乏敏感性，由于条件限制结核菌培养在许多基层医疗机构难以开展，对菌阴肺结核、无痰患者、儿童结核及肺外结核实验室诊断仍比较困难。肺结核临床表现复杂多变，极易误诊漏诊。传统的临床诊断结核的实验室方法有限。因而，发展能用于诊断结核的快速敏感的实验室技术十分重要。
机体感染结核分枝杆菌后，体内存在特异的效应T淋巴细胞，其在体外再次受到结核菌特异抗原的刺激时，会分泌释放IFN-γ，通过检测IFN-γ的水平或计数分泌IFN-γ的外周血PBMC，可以了解机体在感染结核分枝杆菌后的免疫应答状态，从而发现结核分枝杆菌的潜伏感染，进而辅助诊断结核病。T-SPOT.TB是利用结核特异抗原（ESAT-6CFP-10），通过酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测受试者，体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断目前该受试者是否感染结核杆菌。
T-spot.TB试验对结核病的早期、快速、准确诊断明显优于PPD试验[3]，是特异性和灵敏度高的结核分枝杆菌辅助诊断试验。其检测样本灵活，创伤性小，可对外周血、胸水、腹水、脑脊液、心包积液等标本进行结核感染T检测。可根据样本类型，进一步结合影像学检查可对肺外结核进行诊断或者是辅助诊断。对于临床症状不明显和影像学检查显示正常者，可通过结核感染T细胞检测对潜伏性结核分枝杆菌感染者进行预防性治疗或观察。对儿童结核病进行辅助诊断，克服了儿童干咳、无痰，（用其它方法几乎无法检测）的弊端等对临床上痊愈的活动性结核病，应用T-spot.TB技术控制其发生与再发生。
参考文献
[1]肖倩，黄旭峰.T-spot.TB试验快速检测结核杆菌感染的临床应用研究[J].实验与检验医学，2009，27（3）：272-274.
[2]白旭华，霍万学.结核杆菌感染T细胞介导免疫应答研究的新进展[J].微生物学杂志，2012，32（1）：75-79.
[3]荣兰香，马淑红，艾清等.T-spot.TB试验与PPD试验对结核病患者诊断价值相关性比较[J].中国实验诊断学，2013，17（8）：1475-1476.