【摘 要】
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以柚类种质资源为材料,对影响其ISSR-PCR反应结果的模板浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度、循环次数进行了探讨.结果表明,25μL的反应体系为:20-80ng的DNA,0.2mM dNTPs,
【机 构】
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四川省环境科学与生物多样性保护重点实验室,绵阳师范学院生态研究中心,绵阳师范学院生态研究中心,绵阳师范学院生态研究中心,绵阳师范学院生态研究中心 四川南充637002,绵阳师范学院生态研究中心,四川绵
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以柚类种质资源为材料,对影响其ISSR-PCR反应结果的模板浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度、循环次数进行了探讨.结果表明,25μL的反应体系为:20-80ng的DNA,0.2mM dNTPs,2.0mM MgCl2,1μM引物,1.5U Taq酶.PCR扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性40sec,48-58℃(视引物而定)1min,72℃延伸2min,35个循环,72℃延伸7min.
The pummelo germplasm resources were used as the materials to study the template concentration, Taq enzyme concentration, dNTPs concentration, primer concentration and number of cycles that affected the ISSR-PCR reaction results.The results showed that 25μL of reaction system was 20-80ng DNA, 0.2 mM dNTPs, 2.0 mM MgCl 2, 1 μM primer, 1.5 U Taq polymerase. The PCR amplification program was: denaturation at 94 ° C. for 4 min, denaturation at 94 ° C. for 40 sec, 48-58 ° C. for 1 min 2min, 35 cycles, 72 ° C extension 7min.
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