【摘 要】
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目的:对重组尿酸酶和聚乙二醇化重组尿酸酶的酶动力学特征进行研究.方法:建立底物消耗法和产物生成法2种重组尿酸酶活性的测定方法,研究表明二者测定酶活性结果一致.选择尿酸底物消耗法对聚乙二醇修饰前后重组尿酸酶的活性及酶动力学参数进行比较分析.结果:重组尿酸酶在37℃、最适pH 9.0时,对应的Vmax为0.013 μmol·L-1·min-1、Km为33.77 μmol·L-1、Kcat为889.0 min-1;聚乙二醇修饰重组尿酸酶在37℃、最适pH9.5时,对应的Vmax为0.009μmol·L-1·mi
【机 构】
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重庆市食品药品检验检测研究院,重庆401121;重庆派金生物科技有限公司,重庆401331;重庆医药高等专科学校,重庆401331
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目的:对重组尿酸酶和聚乙二醇化重组尿酸酶的酶动力学特征进行研究.方法:建立底物消耗法和产物生成法2种重组尿酸酶活性的测定方法,研究表明二者测定酶活性结果一致.选择尿酸底物消耗法对聚乙二醇修饰前后重组尿酸酶的活性及酶动力学参数进行比较分析.结果:重组尿酸酶在37℃、最适pH 9.0时,对应的Vmax为0.013 μmol·L-1·min-1、Km为33.77 μmol·L-1、Kcat为889.0 min-1;聚乙二醇修饰重组尿酸酶在37℃、最适pH9.5时,对应的Vmax为0.009μmol·L-1·min-1、Km为31.52 μmol·L-1、Kat为615.5 min-1.在相应最适pH条件下,聚乙二醇修饰前后重组尿酸酶的酶比活性均为12.5 U·mg-1.结论:在最适pH条件下,重组尿酸酶经聚乙二醇修饰前后酶比活性和Km值一致,说明聚乙二醇修饰未影响重组尿酸酶的酶比活性,且聚乙二醇修饰前后酶与底物的亲和力未发生改变.与重组尿酸酶比较,聚乙二醇化重组尿酸酶的Vmax降低了约30％,说明聚乙二醇修饰可能会导致尿酸酶的四聚体构象发生改变,从而影响最大反应速度.
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