晚期糖基化终末产物降低成纤维细胞增殖和迁移能力的机制

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目的

探讨晚期糖基化终末产物(AGEs)对成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制。

方法

采集2018年1月至2018年12月华中科技大学同济医学院附属梨园医院创面修复科收治的糖尿病足患者足部创面组织和非糖尿病足患者足部正常创面组织各20例,免疫印迹法(Western blot)检测创面组织中AGEs、波形纤维蛋白(Vimentin)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。取包皮成纤维细胞进行原代培养并鉴定,采用0、100、300、500、1 000、2 000 μg/L的AGEs处理成纤维细胞,以300 μg/L牛血清白蛋白(BSA)为对照组,作用48 h后进行细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、小室迁移(Transwell)实验以及Western blot检测并采用t检验分析结果。

结果

与正常组织比较,糖尿病足组织中AGEs明显偏高(t=3.564,P<0.05),而Vimentin的表达水平偏低(t=8.325,P<0.05),但β-catenin的表达高于正常组织(t=5.738,P<0.05)。分离纯化培养的细胞形态呈梭形,细胞免疫荧光检测95%以上细胞表达Vimentin,鉴定为成纤维细胞。随着加入的AGEs浓度从100、300 μg/L增加至500、1 000μg/L时,成纤维细胞的增殖(t=4.336,PA500/BSA<0.01;t=19.562,PA1000/BSA<0.01;t=42.373,PA2000/BSA<0.01;t=5.380,PA1000/A500<0.01;t=23.726,PA2000/A1000<0.01)和迁移(t=12.117,PA300/BSA<0.01;t=14.484,PA500/BSA<0.01;t=21.940,PA1000/BSA<0.01)能力逐渐降低,呈浓度依赖性。并且,加入AGEs浓度大于300μg/L时,成纤维细胞中的Wnt3α和Wnt7α的表达明显增加,β-catenin的表达相较于对照组有明显的升高,与BSA组比较无明显升高。

结论

AGEs降低成纤维细胞的增殖和迁移能力与Wnt/β-catenin信号通路有关。

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