羧甲基壳聚糖对硝普钠诱导大鼠髓核细胞诱导型一氧化氮合酶和基质金属蛋白酶表达的影响

来源 :中华实验外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tianyi03
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目的 观察羧甲基壳聚糖(CMCS)对硝普钠(SNP)诱导的大鼠椎间盘髓核细胞增殖、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响.方法 使用酶消化法提取大鼠椎间盘髓核细胞并进行体外培养,Ⅱ型胶原免疫组织化学鉴定髓核细胞.通过不同浓度(1、2、3mmol/L)SNP诱导髓核细胞,并在经SNP诱导的髓核细胞内加入不同浓度(100、200、500 mg/L)CMCS进行处理,作用24h后通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖.通过荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法检测不同浓度(100、200、500 mg/L) CMCS对SNP诱导髓核细胞内iNOS及MMP-3表达的影响.结果 培养的细胞经Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定显示其表达阳性,表明为髓核细胞;通过CCK-8检测发现不同浓度SNP可诱导髓核细胞使其增殖活性降低,其中3 mmol/L SNP使髓核细胞增殖降低62% (P<0.05),通过100、200、500 mg/L CMCS作用后髓核细胞增殖分别增加17%、35%和58%;Real-time PCR检测结果表明3 mmol/L SNP可诱导髓核细胞iNOS及MMP-3 mRNA表达增加,分别增加1.84倍和1.24倍,经100、200、500 mg/L CMCS作用后其表达分别降低17%、61%、69%和12%、47%、51% (P< 0.05);Western blot检测结果表明3 mmol/L SNP可诱导髓核细胞iNOS及MMP-3蛋白表达增加,经100、200、500 mg/L CMCS作用后其表达有不同程度的降低.结论 CMCS对SNP诱导的髓核细胞增殖抑制具有保护作用,并对SNP诱导髓核细胞内iNOS及MMP-3表达增高具有抑制作用,从而抑制髓核细胞发生退变。

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