原代牛肝细胞分离和培养方法的建立

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采用胶原酶灌注消化法,对来自新生小牛血清制备厂的牛肝脏尾状突材料进行肝细胞分离,用台盼蓝拒染法测定总细胞数和肝细胞即时存活率,以每孔1×10^4个肝细胞的量接种于牛尾胶原包被的6孔细胞培养板,进行单层培养细胞形态学观察和培养基上清液LDH活性测定。结果显示,每头小牛肝脏尾状突分离获得的细胞产量为(3.558±0.096)×10^4个,肝细胞即时存活率为(84.46±3.56)%,培养24~72h的肝细胞生长状态最好,适合用于有关肝细胞代谢、中毒、基因表达的研究。
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