【摘 要】
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目的建立基于免疫磁珠快速富集分离土壤中炭疽芽孢的方法。方法将炭疽芽孢杆菌疫苗株培养形成芽孢,灭活后免疫家兔,获得多克隆抗体,与磁珠偶联制备免疫磁珠,并检测其在纯炭疽
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室;
【基金项目】
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吉林省青年科研基金(20150520130JH);武汉市科技计划项目(2014060101010051)
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目的建立基于免疫磁珠快速富集分离土壤中炭疽芽孢的方法。方法将炭疽芽孢杆菌疫苗株培养形成芽孢,灭活后免疫家兔,获得多克隆抗体,与磁珠偶联制备免疫磁珠,并检测其在纯炭疽芽孢稀释液中对炭疽芽孢富集分离的敏感性。通过对模拟土壤样品中炭疽芽孢抽提效果的比较,选择最优的芽孢抽提液及抽提条件。采用多重PCR法评价免疫磁珠对土壤中的炭疽芽孢在PLET平板培养基上富集分离的效果。结果 10 mg磁珠经活化后与500μL抗体偶联效果最佳,制备的免疫磁珠在纯炭疽芽孢稀释液中,富集分离的敏感性可达19 cfu/mL。以0.5%Triton X-100蔗糖PBS溶液作为芽孢抽提液,经1 000×g离心5 min后芽孢提取率最高。在模拟土壤样品中,检测敏感性可达100 cfu/g土壤,PLET平板培养基检测的阳性率达30%。结论本研究建立的免疫磁珠法简单实用,适用于土壤等各种类型环境样品中炭疽芽孢的检测。
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