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目的 胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)是导致哮喘气道Th2型免疫反应的关键环节,本课题组前期研究已证实结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)具有抑制哮喘气道炎症和促进Th1免疫反应的作用.本研究通过探讨Ag85B体外诱导小鼠未成熟的mDCs的成熟以及对TSLP介导下mDCs表达促炎分子TSLPR和OX40L的影响,旨在进一步探索Ag85B抑制哮喘气道炎症的可能机制.方法 取6-8周SPF级C57BL/6雌性小鼠,取双下肢股骨和胫骨,利用rmIL-4和rmGM-CSF体外诱生骨髓前体细胞分化为未成熟mDCs,运用免疫磁珠法进行纯化,采用光镜和扫描电镜、流式细胞术进行mDCs细胞形态和细胞表型鉴定；分别用0、50、100、200ng/mL不同浓度的Ag85B或TSLP作用于纯化并鉴定后的mDCs,培养24h,流式细胞术检测表面分子CD80、CD86、TSLPR和OX40L的表达,选取优化的Ag85B或TSLP处理浓度.随后将mDCs随机分为空白对照组、Ag85B处理组、TSLP处理组和Ag85B+TSLP处理组,培养24h后检测mDCs的促炎表面分子TSLPR和OX40L的表达.结果 一、小鼠未成熟mDCs的培养鉴定：1)光镜、电镜形态鉴定：培养7d,光镜下悬浮细胞大量增多,可见细胞突起；进一步电镜观察室,细胞呈类圆形,表面有少量皱褶和较少分叉的树突状突起,符合未成熟mDCs的形态学特点.2)流式细胞学鉴定：富集后的CD11c+细胞表达比率是(90.7800±5.7934)％,表达CD80+、CD86+细胞的比率分别为(27.0680±3.8388)％和(12.3520±2.1857)％,符合未成熟mDCs的CD11c+细胞高表达和CD80+、CD86+相对低表达的表型特征.二、Ag85B和TSLP对小鼠mDCs表达共刺激分子CD80和CD86及促炎表面分子OX40L和TSLPR的作用：Ag85B和TSLP均具有上调mDCs表面共刺激分子CD80和CD86的表达,促进mDCs的成熟；不同浓度Ag85B刺激后,TSLPR和OX40L的表达无明显变化(p＞0.05；100、200ng/mLTSLP刺激后,TSLPR和OX40L的表达水平较空白对照组均增高1倍左右,有显著性差异(P＜0.05).说明Ag85B、TSLP两者均能促进mDCs的成熟,但区别在于TSLP能显著促进mDCs促炎表面分子OX40L和TSLPR的表达,而Ag85B此作用不明显.三、Ag85B对TSLP介导下的mDCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L的影响：选取200ng/mL作为Ag85B和TSLP的优化作用浓度,TSLP组的mDCs的TSLPR+和OX40L+细胞表达的比率分别是(36.5220±13.3048)％和(43.9600±4.5993)％,显著高于空白对照组,分别是空白对照组的2.1倍和2.8倍(p＜0.05).Ag85B处理组、Ag85B+TSLP处理组的TSLPR+和OX40L+细胞表达比率显著低于TSLP组(p＜0.05),并与空白对照组的阳性表达比率相似(P＞0.05).结果表明Ag85B可能对TSLP介导的mDCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L具有抑制作用.结论 Ag85B可通过上调mDCs表达共刺激分子CD80和CD86促进其成熟,同时下调TSLP介导的mDCs表达促炎表面分子TSLPR和OX40L,推测Ag85B可能通过TSLP介导的mDCs途径抑制哮喘的气道炎症.本研究有助于针对哮喘TSLP介导的气道炎症的靶向治疗的研发提供实验基础.