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目的：跨膜型ＴＮＦ－α易在某些蛋白酶的作用下转换下分泌型ＴＮＦ－α。拟用基因突变技术获得稳定表达的，不能转换成Ｓ－ＴＮＦ的ＴＭ－ＴＮＦ突变体。方法：ＲＴ－ＰＣＲ技术，从人外周血单细胞中扩增出编码ＴＭ－ＴＮＦ－α的全长ｃＤＮＡ序列并构建ｐＢＳＫ－ＴＮＦ－α重组体。以此为模板，借助改进的“一次重组ＰＣＲ”定位突变技术，造成ＴＭ－ＴＮＦ转换 为Ｓ－ＴＮＦ酶切位点的缺失，获得ＴＭ－ＴＮＦ突变重组体。