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目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)诱导的成骨细胞复合人源生物衍生骨,构建三维培养体系,观察模拟的造血龛(hematopietic niche)对脐血CD34+造血干/祖细胞(HSPC)增殖的支持作用.方法 分选人骨髓MSC及胎儿颅骨成骨细胞,将培养3代的MSC定向诱导为成骨细胞,分别将①MSC、②颅骨成骨细胞、③MSC与成骨细胞混合物(比例为1∶2)及④MSC诱导的成骨细胞作为饲养细胞复合在人源生物衍生骨上,构建三维培养体系,同时用相应的饲养细胞层构建对应的二维培养体系.免疫磁珠分选脐血CD34+细胞,接种于各培养体系,无外源性细胞因子条件下进行培养.显微镜下观察各饲养细胞与人源生物衍生骨复合情况,通过流式细胞术、半固体细胞集落培养观察比较各培养体系支持HSPC的增殖能力.结果 倒置相差显微镜、扫描电子显微镜以及免疫荧光标记观察结果显示,已成功地将MSC、颅骨成骨细胞、MSC和成骨细胞混合物及MSC诱导的成骨细胞复合在人源生物衍生骨上,构建了造血干细胞三维培养体系.在无外源细胞因子作用下,脐血 HSPC培养2周造血祖细胞集落(CFU-C)与长期培养起始细胞(LTC-IC)分析,三维培养体系各组(①～④)CFU-C明显多于相应二维培养体系各组(①681.00±44.43比438.20±64.24;②729.80±37.72比536.60±35.31;③697.80±54.09比464.80+41.53;④740.20±47.66比513.40±65.56),P＜0.05,但三维培养体系各组间差异无统计学意义(P＞0.05).三维培养体系各组LTC-IC也明显高于相应二维培养体系(分别为①68.00±5.11比26.00±3.73;②93.00±6.12比38.60±4.93;③83.40±5.85比36.20±4.52;④126.00±11.89比59.40±4.25),P＜0.05,且三维培养体系中MSC诱导的成骨细胞组(④)LTC-IC明显多于其他各组.脐血HSPC培养5周,二维培养体系中饲养细胞层已逐渐崩解、脱落、死亡;而三维培养体系中饲养细胞层生长情况较好.三维体系各组CFU-C集落分析显示,MSC诱导的成骨细胞组(④)与其他三组间差异有统计学意义(①112.00±14.21;②186.17±24.80;③126.67±11.52;④257.00±28.78),P＜0.05.结论 骨髓MSC诱导分化的成骨细胞复合人源生物衍生骨构建的三维培养体系,对于脐血HSPC体外培养具有类似体内造血龛的支持作用,成骨细胞对造血干/祖细胞生存、增殖具有重要的调控作用.