【摘 要】
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目的建立主要组织相容性复合物(MHC)移植抗原肽提取方法。方法以供体C57BL/6小鼠脾细胞为移植抗原免疫BALB/c受体小鼠,用p H3.3柠檬酸缓冲液洗脱受体小鼠脾细胞MHC结合抗原肽
【机 构】
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第四军医大学附属西京医院肝胆外科暨器官移植中心,
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目的建立主要组织相容性复合物(MHC)移植抗原肽提取方法。方法以供体C57BL/6小鼠脾细胞为移植抗原免疫BALB/c受体小鼠,用p H3.3柠檬酸缓冲液洗脱受体小鼠脾细胞MHC结合抗原肽,用BCA蛋白测定法和高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测洗脱液中多肽成分,以小鼠异位心脏移植验证洗脱液内多肽的移植免疫抗原性。结果弱酸洗脱获得了微量多肽50μg/108脾细胞,其中含有混杂短多肽。与同系移植组相比,HPLC-MS/MS检测发现同种异体移植组洗脱液中出现差异多肽。同系MHC移植抗原肽预致敏受体心脏移植物中位存活时间为8 d,同种异体MHC移植抗原肽预致敏受体心脏移植物中位存活时间仅4 d。用同种异体来源的MHC移植抗原肽预致敏受体,使小鼠心脏移植物中位存活时间显著缩短。结论通过供体脾细胞免疫,弱酸洗脱受体脾细胞可获得MHC移植抗原肽,可用于进一步筛选移植抗原决定簇。
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