【摘 要】
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目的：通过RNAi技术,筛选出针对小鼠酪氨酸酶的有效siRNA.为酪氨酸酶异常等人类疾病的动物模型制作及该类疾病的预防和治疗奠定基础.方法：利用针对小鼠酪氨酸酶mRNA的不同干扰片
【机 构】
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中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室,广东广州510060中山大学附属第三医院,广东广州510630
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目的：通过RNAi技术,筛选出针对小鼠酪氨酸酶的有效siRNA.为酪氨酸酶异常等人类疾病的动物模型制作及该类疾病的预防和治疗奠定基础.方法：利用针对小鼠酪氨酸酶mRNA的不同干扰片段分别转染小鼠黑色素瘤B16细胞系,同时采用阴性干扰片段转染作为阴性对照,单纯脂质体转染作为空白对照。使用实时荧光定量PCR、酪氨酸酶活性测定和黑色素含量测定三种方法分三个时间点于转染后24小时、48小时、72小时对不同组的细胞干扰结果进行检测。结果：siNM 011661 001、siNM 011661 002、siNM 011661 003三个干扰片段均能在转染后发挥一定的干扰作用,其中siNM 011661 001在转染后发挥的干扰效果最强,在降低酪氨酸酶基因mRNA表达、酶活性、以及黑素含量三方面分别能起到82.81％、64.73％、52.53％的抑制作用。结论：针对小鼠酪氨酸酶的siNM 011661 001序列能在转录后水平发挥高效、稳定的基因沉默作用,是发挥RNAi的优势序列。
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