【摘 要】
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目的 设计并构建人真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因shRNA慢病毒质粒表达载体.方法 设计合成人eIF4E基因RNA干扰双链DNA片段,重组到慢病毒质粒PLVTHM上,然后进行PCR鉴定和
【机 构】
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青岛大学医学院附属医院妇科,郭(韦华)
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目的 设计并构建人真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)基因shRNA慢病毒质粒表达载体.方法 设计合成人eIF4E基因RNA干扰双链DNA片段,重组到慢病毒质粒PLVTHM上,然后进行PCR鉴定和测序分析.重组质粒与3种包装质粒混合,以LipoD293TM DNA In Vitro包裹后转染293T细胞,收获病毒上清液感染宫颈癌HeLa细胞.结果 经过PCR鉴定出的重组载体测序结果与目的序列一致,成功构建人eIF4E基因shRNA慢病毒质粒表达载体及获得相应慢病毒,并成功感染HeLa细胞.可见绿色荧光蛋白表达.结论 成功构建人eIF4E基因shRNA慢病毒载体.为进一步研究宫颈癌基因治疗奠定基础.
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