目的探讨由人表皮干细胞、成纤维细胞和纤维蛋白支架构建组织工程皮肤(TES)及用于皮肤缺损大鼠损伤修复的效果。方法通过胰蛋白酶消化法分离人表皮干细胞和真皮成纤维细胞,传代培养并与纤维蛋白支架构建TES。取60只适龄无特定病原体级雄性大鼠,建立皮肤缺损模型并随机分成TES组、表皮干细胞支架组、成纤维细胞支架组、支架组和对照组,每组12只。术后2、4、6周观察大鼠移植部位和整体情况,获取组织标本行免疫组织化学检查,并统计各组的皮片成活率、创面愈合率、移植物收缩率、微血管数目等指标。比较各组大鼠术后6周新生皮肤厚度及创面完全愈合时间。结果所有大鼠术后饮食、饮水、排便及排尿正常,均无感染情况出现,顺利完成实验。TES组术后2周便完成新生皮肤生长,术后6周新生皮肤质地、韧性和光滑程度均较好,其余4组术后6周观察创面凹陷、显著收缩、新生皮肤欠平整,各组均无肿瘤性组织生长或炎性组织。术后6周,TES组移植物收缩率、创面愈合率、微血管数目、皮肤厚度均明显高于其余4组,且创面完全愈合时间明显短于对照组和支架组[(28±4) d比(44±6)、(42±7) d](均P <0.05)。各组大鼠术后2、4、6周皮片成活率比较差异均无统计学意义(均P> 0.05)。组织学观察发现,术后6周TES组棘细胞层达3～4层,表皮干细胞达8～10层,可见少量淋巴细胞,血管和成纤维细胞排列有序,数目较多。其余4组术后6周开始出现颗粒层、棘层、基底层,角质层不连续;真皮层成纤维细胞排列无序,数目较多,并可见少量淋巴细胞和血管。结论采用人表皮干细胞、成纤维细胞和纤维蛋白支架构建TES可以帮助缺损皮肤快速修复,并改善愈合质量。