研究烟曲霉诱导大鼠呼吸道上皮细胞时是否存在IkB激酶-α(IKBkinase-α,IKKα)调控maspin蛋白表达下调。
方法体外培养大鼠呼吸道上皮细胞(ratbronchialepithelialcells,REC),制备灭活的烟曲霉菌菌丝(Aspergillusfumigatushyphae,AFH)悬液诱导REC细胞,以磷酸盐缓冲液(PBS)为对照,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测REC中maspin基因的表达,并通过免疫细胞化学技术观察maspin蛋白及IKKα在REC的表达情况。进一步制备浓度依次增高的AFHl—3悬液诱导REC细胞,WesternBlot技术检测REC的maspin和IKKα蛋白表达。采用SPSS13.0软件进行方差分析和两变量的相关性分析。
结果RT—PCR检测显示AFH组与对照组的maspin蛋白的mRNA相对表达量分别为0.128±0.059和2.972±0.353,差异具有统计学意义(t=15.883P<0.05)。免疫细胞化学结果显示,maspin蛋白在两组中均表达,其中AFH组呈弱阳性,而对照组呈中度阳性,综合计分两组差异有统计学意义(t=3.721P<0.05);IKKα显色在AFH组中度阳性,在对照组弱阳性,综合计分差异有统计学意义(t=6.825P<0.05)。Western Blot结果maspin与β—actin的灰度比值对照组为0.912±0.023,AFHl—3组分别为0.607±0.030、0.476±0.019、0.416±0.017,组间差异有统计学意义(F=281.91,P<0.05),且任意两组比较差异均有统计学意义;IKKα与β-actin灰度比值对照组为0.624±0.012,AFHl—3组分别为0.739±0.020、0.778±0.010、0.927±0.017,组间差异有统计学意义(F=200.91,P<0.05),且任意两组比较差异均有统计学意义。两变量相关性分析结果显示,maspin蛋白表达与IKKα蛋白表达呈负相关关系(r=-0.911,P<0.05)。
结论AFH诱导大鼠REC中IKKα表达上调并伴有maspin蛋白表达下调。