【摘 要】
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目的 基于自噬探索黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用机制,同时分析两者作用的异同.方法 采用SMMC-7721肝癌细胞,分为对照组、复方组、组方组,分别给予0.1％ DMSO、0.86mg/mL黄连-大黄-肉桂复方和组方(由大黄素、小檗碱和桂皮醛组成,终浓度分别为44μmol/L、23 μmol/L和46μmol/L))作用24h,溶酶体探针染色法观察细胞内溶酶体形成情况;蛋白印迹法检测自噬过程中的关键分子Beelin-1、LC3B和P62的蛋白表达,并计算LC3-Ⅱ
【机 构】
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上海中医药大学基础医学院,上海201203
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目的 基于自噬探索黄连-大黄-肉桂复方及其组分配伍抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用机制,同时分析两者作用的异同.方法 采用SMMC-7721肝癌细胞,分为对照组、复方组、组方组,分别给予0.1％ DMSO、0.86mg/mL黄连-大黄-肉桂复方和组方(由大黄素、小檗碱和桂皮醛组成,终浓度分别为44μmol/L、23 μmol/L和46μmol/L))作用24h,溶酶体探针染色法观察细胞内溶酶体形成情况;蛋白印迹法检测自噬过程中的关键分子Beelin-1、LC3B和P62的蛋白表达,并计算LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值;免疫荧光法检测细胞内LC3B蛋白分布及表达;mCherry-GFP-LC3质粒转染监测自噬流;透射电镜观察自噬体和自噬溶酶体的形成.结果 与对照组比较,用药后:细胞内溶酶体荧光数量明显增多(P＜0.05),但两用药组间无差异;Beclin-1蛋白表达变化不明显;LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值有升高的趋势;P62显著降低(P＜0.05),且复方组有低于组方组的趋势;细胞内LC3B的表达明显升高(P＜0.05),且复方组明显高于组方组(P＜0.05);自噬流有增强的趋势;细胞内自噬体和自噬溶酶体均明显增加.结论 复方及组方抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖的作用可能均与其能促进细胞自噬有关,且复方的作用稍优于组方.
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