探讨Th17/白细胞介素(IL)17轴在小鼠念珠菌性阴道炎发病中作用。
方法120只雌性BALB/c小鼠随机分为雌激素感染组(Ei)、雌激素非感染组(En)、对照感染组(Ci)和对照非感染组(Cn)。Ei、En组在阴道接种前3 d于后腿皮下注射雌二醇0.05 mg,而Ci、Cn组皮下注射灭菌大豆油0.1 ml,以后隔日注射1次直至实验结束;Ei、Ci组在接种日在阴道内接种白念珠菌悬液10 μl (5 × 104个孢子),而En、Cn组阴道内注入10 μl无菌磷酸盐缓冲液。接种后3、7、14 d,每组于各时间点分别随机取10只小鼠处死,完整切取阴道组织作液氮冷冻或石蜡包埋,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、Western印迹和免疫荧光染色分别检测阴道组织中维A酸相关孤儿受体(ROR)γt、RORα、IL-17 mRNA、蛋白表达及免疫荧光强度。
结果激光共聚焦显微镜显示,En、Cn组中RORγt、RORα和IL-17主要表达于阴道固有膜及血管中炎症细胞,Ci组中主要表达于黏膜上皮及其表面附着的菌丝、固有膜及血管中炎症细胞,Ei组中则广泛分布于黏膜上皮、固有膜及血管中炎症细胞、阴道腔和黏膜上皮中内吞菌丝。qRT-PCR和免疫荧光检查显示,En、Ci和Ei组中RORγt、RORα、IL-17 mRNA表达及其免疫荧光强度在相同时间点均显著高于Cn组(均P < 0.05),且Ei组显著高于En、Ci组(P < 0.05);除Cn组外,其余各组中RORγt、RORα、IL-17 mRNA表达及其免疫荧光强度均随时间延长有增加的趋势,其中RORγt、RORα mRNA和免疫荧光强度及IL-17 mRNA一般在14 d时最高,而IL-17免疫荧光强度在7 d时最高(P < 0.05)。Western印迹显示,Ci、Ei组中RORγt和IL-17蛋白表达在相同时间点均明显高于Cn、En组(RORγt:F组别= 45.685,P < 0.001 ;IL-17:F组别= 29.655,P < 0.01),其中Ei组表达水平最高(P < 0.05),而Cn、En组表达差异无统计学意义(P > 0.05);Ci、Ei组中二者表达均在感染后7 d明显上调,14 d无显著增加(RORγt:F时间= 13.137,P < 0.001; IL-17:F时间= 11.182,P < 0.001)。
结论阴道念珠菌感染可上调RORγt、RORα、IL-17表达,提示Th17/IL-17轴可能参与BALB/c小鼠念珠菌性阴道炎发生。