【摘 要】
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目的 亚克隆和表达广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶(γ-butyrobetaine hydroxylase,GAMMA-BBH)基因,对该蛋白属性进行鉴定,定量检测不同虫龄该目的基因表达量.方法 PCR扩增G
【机 构】
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广东省人民医院医学研究中心,广州,510080;中山大学基础医学院寄生虫学教研室,广州,510080
【基金项目】
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国家自然科学基金-广东省政府联合基金;广东省人民医院科研项目;广东省医学科学技术研究基金;国家科技攻关项目;广东省广州市科技计划
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目的 亚克隆和表达广州管圆线虫γ-丁基甜菜碱羟化酶(γ-butyrobetaine hydroxylase,GAMMA-BBH)基因,对该蛋白属性进行鉴定,定量检测不同虫龄该目的基因表达量.方法 PCR扩增GAMMA-BBHcDNA基因,产物经Nco I和Hind Ⅲ限制性内切酶酶切后连接至原核表达载体重组为pET-BBH,在BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot和酶活性测定鉴定表达产物.用荧光定量PCR方法检测广州管圆线虫不同虫龄GAMMA-BBH的表达量.结果 PCR和核苷酸序列测定结果 表明pET-BBH构建正确并能在IPTG诱导下表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表明表达产物分子量与预期分子量(Mr=48 500)一致,酶学测定显示表达产物有GAMMA-BBH的酶活性,荧光定量PCR方法检测结果显示GAMMA-BBH在虫体不同虫龄期表达量不一致.结论 目的基因能正确编码并表达具有酶活性的GAMMA-BBH,该酶的表达量与虫龄和寄生部位可能有关.
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