含人β-内啡呔融合基因的腺病毒／腺相关杂合病毒载体的构建与鉴定

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【摘要】

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目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒/腺相关杂合病毒.方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒/腺相关杂合病毒.P

【作者】

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徐学武俞卫锋王星华李泉董刚吴飞翔

【机构】

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第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室

【出处】

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生物技术

【发表日期】

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2005年4期

【关键词】

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目的:构建含人β-内啡呔融合基因的腺病毒/腺相关杂合病毒.方法:构建腺病毒穿梭质粒pDC312-DTREE,与骨架质粒共转染HEK293细胞,细胞内同源重组包装出腺病毒/腺相关杂合病毒.PCR法鉴定病毒及TCID50法测定病毒滴度.杂合病毒感染NIH3T3细胞观察转基因的表达,ELISA法测定表达产物浓度.结果:穿梭质粒pDC312-DTREE经限制性核酸内切酶AatⅡ及NotⅠ酶切结果正确.PCR鉴定结果表明病毒DNA内有人β-内啡呔DNA序列,且无野生型病毒的污染,病毒滴度为1.29×10

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