【摘 要】
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研制具有广谱作用的新型纳米重组亚单位疫苗,为新型流感纳米疫苗的研发奠定基础.将跨膜蛋白M2的胞外域(M2e)和H1、H3、B亚型流感血凝素的第2亚单位的保守区域通过4GS蛋白Link
【机 构】
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扬州大学兽医学院,江苏扬州225100;军事医学研究院军事兽医研究所,吉林长春130122;军事医学研究院军事兽医研究所,吉林长春130122;扬州大学兽医学院,江苏扬州225100
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研制具有广谱作用的新型纳米重组亚单位疫苗,为新型流感纳米疫苗的研发奠定基础.将跨膜蛋白M2的胞外域(M2e)和H1、H3、B亚型流感血凝素的第2亚单位的保守区域通过4GS蛋白Linker连接至铁蛋白,将M2e-HA2-Ferrtin基因(MHF基因)克隆至原核表达载体pET32a,将重组质粒转化到感受态细胞BL21(DE3),经IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)体外诱导表达,通过镍柱纯化,利用不同浓度的咪唑洗脱液洗脱蛋白,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白产物.经透射电子显微镜和纳米粒度仪观察其构象及大小.结果表明成功构建表达纯化重组流感蛋白,经PCR扩增出MHF为1 071 bp大小片段,经SDS-PAGE和Western blot检测蛋白产物,重组流感蛋白以可溶性形式存在,大小为61 kDa且具有生物学活性,电子透射显微镜观察其构型,可见pET32a-M2e-HA2-Ferrtin融合蛋白形成类病毒样颗粒,大小均一.经纳米粒度仪分析,平均粒径Xav=61.58 nm.本研究成功表达纯化并验证多表位流感纳米蛋白,为新型流感纳米疫苗的研制奠定了基础.
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