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摘要：目的研究消痔方颗粒的抗炎止痛作用。方法采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀、组胺致大鼠毛细血管通透性增强、棉球诱导大鼠肉芽组织增生和角叉菜胶致大鼠胸膜炎模型，观察消痔方颗粒的抗炎作用；采用热板致小鼠疼痛反应和冰乙酸致小鼠扭体反应模型，观察消痔方颗粒的止痛作用。结果与对照组比较，消痔方颗粒各剂量组均能显著抑制小鼠耳廓肿胀（P<0.01），高中剂量组显著抑制大鼠毛细血管通透性增强、肉芽组织增生和胸腔渗出液白细胞总数（P<0.05或P<0.01或P<0.001），高剂量组能显著抑制大鼠足肿胀和胸腔渗出液体积（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，消痔方颗粒高剂量组能显著提高小鼠的痛阈和减少小鼠扭体反应（P<0.05）。结论消痔方颗粒具有明显的抗炎作用和一定的止痛作用。
关键词：消痔方颗粒；抗炎作用；止痛作用
中图分类号：R-33文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）12-0067-03
肛肠痔瘘病俗称痔疮，是临床常见的肛肠疾病，目前对其的治疗应以非手术治疗为主已达成共识[1]。消痔汤方来源于已故全国首批名老中医陆永昌主任医师的临床经验方，由熟大黄、金银花、土茯苓、连翘、漏芦等九味药材配伍而成，具有清热解毒，行气化瘀，消肿止痛之功能，用于治疗因气滞血瘀兼湿热毒所致痔疮[2]。为传承名老中医治疗痔疮临床验方，课题组采用现代制剂提取制备技术，将临床经验方消痔方制备成口服固体制剂消痔方颗粒。本实验观察消痔方颗粒对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀、组胺致大鼠毛细血管通透性增强、棉球诱导大鼠肉芽组织增生、角叉菜胶致大鼠胸膜炎、热板致小鼠疼痛反应和冰乙酸致小鼠扭体反应模型的影响，评价其抗炎和止痛作用，为其临床应用提供实验依据。
1实验材料
1.1实验动物KM小鼠，雌雄兼用，体重19～22 g，SPF级，动物合格证号211002300016301；SD大鼠，雌雄兼用，体重140～170 g，SPF级，动物合格证号购211002300017152和211002300019720，均由辽宁长生生物技术有限公司提供。饲养于吉林省中医药科学院实验动物中心，环境温度（22±2）℃，相对湿度50%～60%。根据实验性质和性别分笼饲养，自由采食饮水。
1.2受试药物消痔方颗粒，深棕色粉末，制粒前不含赋形剂的药粉，每克含生药3.79 g，由课题组自制，批号：20150401；痔速宁片（辽宁康博士制药有限公司，国药准字Z19983111，批号：150101013），临用时均以水配成所需浓度的混悬液。
1.3主要试剂角叉菜胶（沈阳药科大学中药系）；磷酸组织胺（上海丽珠东风生物技术有限公司，批号：011113）；伊文思蓝（上海谱振生物科技有限公司，批号：RS8420B35）；二甲苯、丙酮、冰乙酸（北京化工厂产品，分析纯）。
1.4实验仪器BT 125D分析天平（德国赛多利斯公司）；YLS-Q4耳肿打耳器（直径8 mm，山东省医学科學院设备站）；游标卡尺（上海量具刃具厂，测量范围0～155 mm，精确度0.02 mm）；752型紫外分光光度计（上海第三分析仪器厂）；HH-W21-420 型电热恒温水浴箱（上海跃进医疗器械厂）；800B 型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；GL-8402 型热板测痛仪（浙江宁海白石电子仪器厂）；PYX-DHS 型隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械一厂）。
2实验方法
2.1抗炎作用药效学实验研究
2.1.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[3]取小鼠60只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.8 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（5.6、2.8、1.4 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药前饥饿16 h，末次给药1h后每鼠右侧耳廓前后两侧均匀涂布二甲苯50 μL，左耳作为自身对照，涂耳1 h后脱臼处死，剪下双耳，用直径为9 mm的打孔器在两耳耳廓相应部位打下耳片，电子天平称重，以每鼠左右耳片重量差作为肿胀程度。
2.1.2对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响[4]取大鼠50只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h每鼠右后足足趾腱膜下注射0.5%角叉菜胶0.1 mL，注射后每1 h分别测定左右足趾和踝关节直径，测定6 h，以每鼠左右后足趾及踝关节圆周和之差作为肿胀程度。
2.1.3对组胺致大鼠毛细血管通透性增强的影响[5]取大鼠50只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h每鼠背部皮内注射组胺50 μL（4 mg/mL），立即尾静脉注射1% 伊文思蓝4 mL/kg，20 min后断头处死，剥皮测着色皮斑面积，将蓝斑剪碎浸泡于4mL丙酮生理盐水（7：3）中，浸泡24 h，离心（3000 rpm/min），取上清液，以正常大鼠皮肤为对照，分光光度计610 nm波长处测光密度。
2.1.4对棉球诱导大鼠肉芽组织增生影响[6]取大鼠50只，随机分成5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药3 d，1次/d，各组大鼠乙醚浅麻醉，两侧腋窝用碘酒消毒，70%酒精脱碘，将已灭菌干燥的棉球（棉球重50 ± 1 mg，高压灭菌后，每个加入氨苄青霉素1 mg/0.1 mL，50℃烘干）植入双侧腋窝下，术后继续给药7 d，术后第8 d断头处死大鼠，剥离棉球肉芽组织，70℃烘干后称定重量，以棉球肉芽组织干重减去原棉球重量作为肉芽组织增生量。 2.1.5对角叉菜胶致大鼠胸膜炎的影响[7]取大鼠50只，随机分为5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h每鼠右侧胸腔注入0.5%角叉菜胶0.5 mL，5 h后断头处死大鼠，测定胸腔渗出液体积和白细胞总数。
2.2止痛作用药效学实验研究
2.2.1对热板致小鼠疼痛反应影响[8]选取在热板温度（55 ± 0.5）℃条件下，痛阈值在5～30 s之间小鼠60只，兼顾体重和痛阈值随机分成5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.8 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（5.6、2.8、1.4 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h、3h和5 h分别测定小鼠在热板温度（55 ± 0.5）℃条件下的痛阈值。
2.2.2对冰醋酸致小鼠扭体反应的影响[8]取小鼠60只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.8 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（5.6 g/kg/d、2.8 g/kg/d、1.4 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h，每鼠腹腔注射0.8%冰醋酸0.2 mL，适应5 min后，记录注射后5～15 min内小鼠扭体反应次数。
2.7统计学方法采用SPSS18.0统计学软件分析数据，所得实验数据以（x±s）表示，组间数据比较采用t检验，以P<0.05有统计学意义。
3结果
3.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响与对照组相比，消痔方颗粒各剂量组对小鼠耳廓肿胀均有显著地抑制作用（P<0.01），且随剂量增加抑制作用增强，痔速宁片所给剂量亦对小鼠耳廓肿胀有显著地抑制作用（P<0.01）。结果见表1。
4讨论
炎症是具有血管系统的活体组织对组织损伤或致病因子侵入所发生的防御反应。炎症渗出组织肿胀是炎症早期的重要指标，致炎剂二甲苯作用于耳廓，刺激肥大细胞释放组织胺、5-羟色胺等血管活性胺类，引起耳廓微血管扩张和通透性升高，组织液外渗，引发水肿[9]；致炎剂角叉菜胶引起局部白细胞浸润、前列腺素E2合成增加和补体系统的激活，致炎后1 h内的水肿主要由组胺和5-羟色胺释放引起；致炎后3 h时，主要由前列腺素E2引起，2期之间的水肿主要有激肽类物质维持[10]。消痔方颗粒对二甲苯所致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀有明显的抑制作用，对组胺引起大鼠毛细血管通透性增强有拮抗作用。棉球肉芽肿模型是慢性炎症模型，病灶内主要有淋巴细胞、浆细胞和单核巨噬细胞的浸润及多种炎症介质的释放，同时成纤维细胞和单核巨噬细胞增殖，形成肉芽组织[11]，与临床上某些炎症的后期病理改变相似，对大鼠棉球肉芽组织增生有明显的抑制作用。角叉菜胶复制的大鼠胸膜炎模型是以炎性渗出和白细胞游走为主要改变的急性炎症模型[7]，消痔方颗粒明显减少大鼠胸腔渗出液体积和渗出液中白细胞总数。同时，消痔方颗粒抑制冰醋酸所致小鼠扭体反应次数，提高热板致小鼠疼痛模型痛阈值，表明其有止痛作用。本实验为消痔方颗粒系统的药理机制研究和临床应用提供了药效学基础。
参考文献：
[1]杨玉琪，倪凯，赵远.浅析治疗痔疮的外用中药制剂及其特点[J].云南中医中药杂志，2007，28（11）：30-31.
[2]陆维娜，陆峰.陆永昌[M].北京：中国中医药出版社，2007，138.
[3]谷捷，李鑫，余黄合，等.二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症模型的建立[J].湖南中医药大学学报，2016，36（5）：32-35.
[4]肖百全，朱少璇，杨威，等.角叉菜胶致大鼠足肿胀模型的探讨与机制研究[J].中国实用医药，2008，3（23）：63-65.
[5]段小花，楊莲，李钦，等.皮内与皮下注射磷酸组胺对皮肤毛细血管通透性实验结果的影响[J].云南中医学院学报，2008，31（4）：35-37.
[6]赵晓娟，陈根林，王萌，等.芍芪多苷的抗炎及其作用机制研究[J].中国临床药理学杂志，2008，24（2）：139-142.
[7]黄媛恒，陈健，黄仁彬，等.玉郎伞提取物对模型大鼠胸膜炎TNF-α、PGE2、NO的影响.中国药房，2010，21（3）：200-202.
[8]乔敏，孟莉，向绍杰，等.盆炎净颗粒的药效学实验研究[J].辽宁中医药大学学报，2009，11（7）：207-209.
[9]郭文贤，戴卫波，梅全喜，等.利尿合剂抗炎镇痛及体外抑菌作用研究[J].药物评价研究，2017，40（2）：201-205.
[10]Kale M，Misar AV，Dave V，et al.Anti-inflammatory activity of Dalbergia lanceolaria bark ethanol extract in mice and rats.J Ethnopharmacol，2007，112（2）：300-304.
[11]Gupta M，Mazumdar UK，Sivakumar T，et al.Evaluation of anti-inflammatory activity of chloroform extract of Bryonia laciniosa in experimental animal models[J].Biol Pharm Bull，2003，26（9）：1342-1344.
（收稿日期：2017-09-22）
关键词：消痔方颗粒；抗炎作用；止痛作用
中图分类号：R-33文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）12-0067-03
肛肠痔瘘病俗称痔疮，是临床常见的肛肠疾病，目前对其的治疗应以非手术治疗为主已达成共识[1]。消痔汤方来源于已故全国首批名老中医陆永昌主任医师的临床经验方，由熟大黄、金银花、土茯苓、连翘、漏芦等九味药材配伍而成，具有清热解毒，行气化瘀，消肿止痛之功能，用于治疗因气滞血瘀兼湿热毒所致痔疮[2]。为传承名老中医治疗痔疮临床验方，课题组采用现代制剂提取制备技术，将临床经验方消痔方制备成口服固体制剂消痔方颗粒。本实验观察消痔方颗粒对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀、组胺致大鼠毛细血管通透性增强、棉球诱导大鼠肉芽组织增生、角叉菜胶致大鼠胸膜炎、热板致小鼠疼痛反应和冰乙酸致小鼠扭体反应模型的影响，评价其抗炎和止痛作用，为其临床应用提供实验依据。
1实验材料
1.1实验动物KM小鼠，雌雄兼用，体重19～22 g，SPF级，动物合格证号211002300016301；SD大鼠，雌雄兼用，体重140～170 g，SPF级，动物合格证号购211002300017152和211002300019720，均由辽宁长生生物技术有限公司提供。饲养于吉林省中医药科学院实验动物中心，环境温度（22±2）℃，相对湿度50%～60%。根据实验性质和性别分笼饲养，自由采食饮水。
1.2受试药物消痔方颗粒，深棕色粉末，制粒前不含赋形剂的药粉，每克含生药3.79 g，由课题组自制，批号：20150401；痔速宁片（辽宁康博士制药有限公司，国药准字Z19983111，批号：150101013），临用时均以水配成所需浓度的混悬液。
1.3主要试剂角叉菜胶（沈阳药科大学中药系）；磷酸组织胺（上海丽珠东风生物技术有限公司，批号：011113）；伊文思蓝（上海谱振生物科技有限公司，批号：RS8420B35）；二甲苯、丙酮、冰乙酸（北京化工厂产品，分析纯）。
1.4实验仪器BT 125D分析天平（德国赛多利斯公司）；YLS-Q4耳肿打耳器（直径8 mm，山东省医学科學院设备站）；游标卡尺（上海量具刃具厂，测量范围0～155 mm，精确度0.02 mm）；752型紫外分光光度计（上海第三分析仪器厂）；HH-W21-420 型电热恒温水浴箱（上海跃进医疗器械厂）；800B 型台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；GL-8402 型热板测痛仪（浙江宁海白石电子仪器厂）；PYX-DHS 型隔水式电热恒温培养箱（上海跃进医疗器械一厂）。
2实验方法
2.1抗炎作用药效学实验研究
2.1.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[3]取小鼠60只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.8 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（5.6、2.8、1.4 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药前饥饿16 h，末次给药1h后每鼠右侧耳廓前后两侧均匀涂布二甲苯50 μL，左耳作为自身对照，涂耳1 h后脱臼处死，剪下双耳，用直径为9 mm的打孔器在两耳耳廓相应部位打下耳片，电子天平称重，以每鼠左右耳片重量差作为肿胀程度。
2.1.2对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响[4]取大鼠50只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h每鼠右后足足趾腱膜下注射0.5%角叉菜胶0.1 mL，注射后每1 h分别测定左右足趾和踝关节直径，测定6 h，以每鼠左右后足趾及踝关节圆周和之差作为肿胀程度。
2.1.3对组胺致大鼠毛细血管通透性增强的影响[5]取大鼠50只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h每鼠背部皮内注射组胺50 μL（4 mg/mL），立即尾静脉注射1% 伊文思蓝4 mL/kg，20 min后断头处死，剥皮测着色皮斑面积，将蓝斑剪碎浸泡于4mL丙酮生理盐水（7：3）中，浸泡24 h，离心（3000 rpm/min），取上清液，以正常大鼠皮肤为对照，分光光度计610 nm波长处测光密度。
2.1.4对棉球诱导大鼠肉芽组织增生影响[6]取大鼠50只，随机分成5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药3 d，1次/d，各组大鼠乙醚浅麻醉，两侧腋窝用碘酒消毒，70%酒精脱碘，将已灭菌干燥的棉球（棉球重50 ± 1 mg，高压灭菌后，每个加入氨苄青霉素1 mg/0.1 mL，50℃烘干）植入双侧腋窝下，术后继续给药7 d，术后第8 d断头处死大鼠，剥离棉球肉芽组织，70℃烘干后称定重量，以棉球肉芽组织干重减去原棉球重量作为肉芽组织增生量。 2.1.5对角叉菜胶致大鼠胸膜炎的影响[7]取大鼠50只，随机分为5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.3 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（4、2、1 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h每鼠右侧胸腔注入0.5%角叉菜胶0.5 mL，5 h后断头处死大鼠，测定胸腔渗出液体积和白细胞总数。
2.2止痛作用药效学实验研究
2.2.1对热板致小鼠疼痛反应影响[8]选取在热板温度（55 ± 0.5）℃条件下，痛阈值在5～30 s之间小鼠60只，兼顾体重和痛阈值随机分成5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.8 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（5.6、2.8、1.4 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h、3h和5 h分别测定小鼠在热板温度（55 ± 0.5）℃条件下的痛阈值。
2.2.2对冰醋酸致小鼠扭体反应的影响[8]取小鼠60只，随机均分5组，分别为对照组、痔速宁片组（1.8 g/kg/d），消痔方颗粒高、中、低剂量组（5.6 g/kg/d、2.8 g/kg/d、1.4 g/kg/d），连续ig给药5 d，1次/d，末次给药后1 h，每鼠腹腔注射0.8%冰醋酸0.2 mL，适应5 min后，记录注射后5～15 min内小鼠扭体反应次数。
2.7统计学方法采用SPSS18.0统计学软件分析数据，所得实验数据以（x±s）表示，组间数据比较采用t检验，以P<0.05有统计学意义。
3结果
3.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响与对照组相比，消痔方颗粒各剂量组对小鼠耳廓肿胀均有显著地抑制作用（P<0.01），且随剂量增加抑制作用增强，痔速宁片所给剂量亦对小鼠耳廓肿胀有显著地抑制作用（P<0.01）。结果见表1。
4讨论
炎症是具有血管系统的活体组织对组织损伤或致病因子侵入所发生的防御反应。炎症渗出组织肿胀是炎症早期的重要指标，致炎剂二甲苯作用于耳廓，刺激肥大细胞释放组织胺、5-羟色胺等血管活性胺类，引起耳廓微血管扩张和通透性升高，组织液外渗，引发水肿[9]；致炎剂角叉菜胶引起局部白细胞浸润、前列腺素E2合成增加和补体系统的激活，致炎后1 h内的水肿主要由组胺和5-羟色胺释放引起；致炎后3 h时，主要由前列腺素E2引起，2期之间的水肿主要有激肽类物质维持[10]。消痔方颗粒对二甲苯所致小鼠耳肿胀和角叉菜胶致大鼠足肿胀有明显的抑制作用，对组胺引起大鼠毛细血管通透性增强有拮抗作用。棉球肉芽肿模型是慢性炎症模型，病灶内主要有淋巴细胞、浆细胞和单核巨噬细胞的浸润及多种炎症介质的释放，同时成纤维细胞和单核巨噬细胞增殖，形成肉芽组织[11]，与临床上某些炎症的后期病理改变相似，对大鼠棉球肉芽组织增生有明显的抑制作用。角叉菜胶复制的大鼠胸膜炎模型是以炎性渗出和白细胞游走为主要改变的急性炎症模型[7]，消痔方颗粒明显减少大鼠胸腔渗出液体积和渗出液中白细胞总数。同时，消痔方颗粒抑制冰醋酸所致小鼠扭体反应次数，提高热板致小鼠疼痛模型痛阈值，表明其有止痛作用。本实验为消痔方颗粒系统的药理机制研究和临床应用提供了药效学基础。
参考文献：
[1]杨玉琪，倪凯，赵远.浅析治疗痔疮的外用中药制剂及其特点[J].云南中医中药杂志，2007，28（11）：30-31.
[2]陆维娜，陆峰.陆永昌[M].北京：中国中医药出版社，2007，138.
[3]谷捷，李鑫，余黄合，等.二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症模型的建立[J].湖南中医药大学学报，2016，36（5）：32-35.
[4]肖百全，朱少璇，杨威，等.角叉菜胶致大鼠足肿胀模型的探讨与机制研究[J].中国实用医药，2008，3（23）：63-65.
[5]段小花，楊莲，李钦，等.皮内与皮下注射磷酸组胺对皮肤毛细血管通透性实验结果的影响[J].云南中医学院学报，2008，31（4）：35-37.
[6]赵晓娟，陈根林，王萌，等.芍芪多苷的抗炎及其作用机制研究[J].中国临床药理学杂志，2008，24（2）：139-142.
[7]黄媛恒，陈健，黄仁彬，等.玉郎伞提取物对模型大鼠胸膜炎TNF-α、PGE2、NO的影响.中国药房，2010，21（3）：200-202.
[8]乔敏，孟莉，向绍杰，等.盆炎净颗粒的药效学实验研究[J].辽宁中医药大学学报，2009，11（7）：207-209.
[9]郭文贤，戴卫波，梅全喜，等.利尿合剂抗炎镇痛及体外抑菌作用研究[J].药物评价研究，2017，40（2）：201-205.
[10]Kale M，Misar AV，Dave V，et al.Anti-inflammatory activity of Dalbergia lanceolaria bark ethanol extract in mice and rats.J Ethnopharmacol，2007，112（2）：300-304.
[11]Gupta M，Mazumdar UK，Sivakumar T，et al.Evaluation of anti-inflammatory activity of chloroform extract of Bryonia laciniosa in experimental animal models[J].Biol Pharm Bull，2003，26（9）：1342-1344.
（收稿日期：2017-09-22）