【摘 要】
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目的探讨聚-ADP-核糖基化在Cr(Ⅵ)致细胞损害中的作用。方法选用前期建立的聚-ADP-核糖水解酶(PARG)缺陷的人支气管上皮细胞(16HBE细胞)作为研究对象，选用不同剂量的Cr(Ⅵ)分别染毒，并处理正常16HBE细胞和PARG缺陷细胞24 h，同时设立溶剂对照组，比较两种细胞对Cr(Ⅵ)毒作用的差异；在此基础上，选取5.0 μmol/L的Cr(Ⅵ)作为染毒剂量，染毒处理两种细胞后，提取细胞
【机 构】
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530021南宁，广西医科大学公共卫生学院,530021南宁，广西医科大学公共卫生学院,深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室,深圳市疾病预防控制中心现代毒理学重点实验室,深圳市疾病预防控制中心现
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目的探讨聚-ADP-核糖基化在Cr(Ⅵ)致细胞损害中的作用。
方法选用前期建立的聚-ADP-核糖水解酶(PARG)缺陷的人支气管上皮细胞(16HBE细胞)作为研究对象，选用不同剂量的Cr(Ⅵ)分别染毒，并处理正常16HBE细胞和PARG缺陷细胞24 h，同时设立溶剂对照组，比较两种细胞对Cr(Ⅵ)毒作用的差异；在此基础上，选取5.0 μmol/L的Cr(Ⅵ)作为染毒剂量，染毒处理两种细胞后，提取细胞总蛋白进行双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)分析，计算比较两种细胞染毒前、后的总蛋白表达差异，对差异蛋白点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)鉴定，并进一步使用Western blot验证。
结果Cr(Ⅵ)作用后，PARG缺陷细胞的存活较正常16HBE细胞多，当作用剂量达到5.0 μmol/L时，16HBE细胞和PARG缺陷细胞的存活率分别为(59.67±6.43)%和(82.00±6.25)%，两者之间的差异有统计学意义(t＝–4.32，P<0.05)；2D-DIGE分析比较正常16HBE细胞与PARG缺陷细胞Cr(Ⅵ)染毒前、后蛋白差异，共筛选且成功鉴定出18个蛋白，这些蛋白的功能涉及维持细胞形态、参与能量代谢、DNA损伤修复以及基因表达调控。Western blot成功验证出差异表达蛋白cofilin-1，其在染毒后的16HBE细胞中表达上调，相对表达量为1.41±0.04，对照组表达量为1.00±0.01，差异有统计学意义(t＝–18.00, P<0.05)。在PARG缺陷细胞表达差异无统计学意义(t＝–8.61，P>0.05)。
结论鉴定出的差异蛋白大多与肿瘤发生密切相关，推测聚-ADP-核糖基化反应可通过抑制Cr(Ⅵ)诱导的肿瘤发生从而对抗Cr(Ⅵ)的细胞毒性，这为阐明聚-ADP-核糖基化在Cr(Ⅵ)致细胞损害中的作用机制提供了重要的参考依据。
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