【摘 要】
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成肌细胞(myoblast)具有自我更新和多向分化的能力,对骨骼肌的再生和修复起着重要作用。为了建立奶山羊(Capra hircus)肌细胞的体外分离纯化、培养和鉴定的方法,了解其增殖和
【机 构】
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西北农林科技大学动物科技学院; 浙江理工大学生命科学学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.31501983);国家重点研发计划(No.2017YFD0502005);陕西省重点研发计划项目(No.2018ZDXM-NY-033)
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成肌细胞(myoblast)具有自我更新和多向分化的能力,对骨骼肌的再生和修复起着重要作用。为了建立奶山羊(Capra hircus)肌细胞的体外分离纯化、培养和鉴定的方法,了解其增殖和成肌特性,为奶山羊肌肉发育调控机理研究提供实验材料,本研究采集西农萨能奶山羊羔羊骨骼肌组织,采用I型胶原酶和胰酶两步酶消化法分离细胞,结合差速贴壁纯化得到成肌细胞,利用qRT-PCR和免疫荧光染色法对分离纯化后的成肌细胞进行进一步鉴定。细胞形态学观察结果显示,分离纯化后的成肌细胞呈梭形,生长状态良好;qRT-PCR和免疫荧光染色结果显示,生肌调节因子5(myogenic regulatory factor5, Myf5)和成肌决定因子(myogenic differentiation factor, MyoD)、结蛋白(desmin)呈阳性表达,纯化后的成肌细胞纯度大于95%;诱导分化后的成肌细胞能够相互融合形成肌管,成肌特异性标志蛋白肌球蛋白重链(myosin heavy chain, MYHC)呈阳性表达。本研究建立了奶山羊成肌细胞体外分离培养的方法,并成功获得了高纯度的具有增殖和成肌特性的成肌细胞,可用于奶山羊肌肉发育调控研究。
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