探讨HOX转录反义RNA(HOTAIR)调节结直肠癌(CRC)细胞增殖的机制。
方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人CRC细胞系及人正常结肠黏膜上皮细胞FHC中HOTAIR表达。用HOTAIR小干扰RNA(siRNA)降低CRC细胞中HOTAIR水平，细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测沉默HOTAIR对CRC细胞增殖的影响。流式细胞术分析沉默HOTAIR对细胞凋亡及周期的影响。Western blot检测凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3/Caspase-7的表达。荧光素酶报告系统检测HOTAIR的作用靶点。
结果HOTAIR及转录因子DP-2(TFDP2)在CRC细胞中高表达(P<0.05)，而微小RNA(miRNA，miR) 148a-3p在CRC细胞中低表达(P<0.05)。荧光素酶报告结果显示，miR-148a-3p是HOTAIR的直接靶点，TFDP2是miR-148a-3p的直接作用靶点。HOTAIR下调后细胞吸光度值在培养第2天时(HCT-116：0.425±0.002，SW480：0.437±0.007)即明显低于对照组(HCT-116：0.468±0.002，SW480：0.518±0.007)(P<0.05)，细胞凋亡比例增加(HOTAIR下调比对照：HCT-116：16.417±1.407比6.002±0.301；SW480：16.493±0.653比6.240±0.346)以及发生G0/G1期阻滞(HOTAIR下调比对照：HCT-116：72.267±0.834比66.050±0.687；SW480：71.857±1.174比65.833±1.103) (P<0.05)。下调miR-148a-3p可以逆转沉默HOTAIR对CRC细胞增殖、凋亡及周期阻滞的影响。
结论HOTAIR通过调节miR-148a-3p/TFDP2轴影响CRC细胞增殖。