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目的
获得可进行条件性过表达XBP1s基因的Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。
方法通过In-Fusion Cloning的方法构建胚胎干细胞(ES细胞)打靶载体，并进行线性化，电转染JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性ES细胞克隆，经长片段PCR鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞经克隆扩增后，注射入C57BL/6J小鼠的囊胚中，获得嵌合鼠，筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得阳性F1代小鼠，并分别进行PCR和测序鉴定。
结果经酶切鉴定证明打靶质粒构建成功，经胚胎干细胞打靶共获得144个抗性ES细胞克隆，通过长片段PCR的方式对同源重组阳性克隆进行筛选和克隆经测序确认，共获得21个正确同源重组的阳性克隆。阳性ES细胞克隆E3、C6经扩增后注射C57BL/6J小鼠囊胚96个，通过胚胎移植，共获得2只高嵌合雄鼠，与野生型C57BL/6J小鼠交配后获得3只F1代杂合小鼠，经PCR及测序鉴定正确。
结论成功建立了XBP1s基因的Rosa26定点敲入F1代杂合子小鼠，为未来获得免疫细胞、肾脏固有细胞及腹膜间皮细胞XBP1s条件性敲入小鼠奠定了基础。