【摘 要】
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为了建立能够同时检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)单一或混合感染的PCR检测方法,参考GenBank中PRV gE基因、PCV2和PCV3全基因序列,针对P
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;河南泌阳县农业科学研究所,河南泌阳463700
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为了建立能够同时检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)单一或混合感染的PCR检测方法,参考GenBank中PRV gE基因、PCV2和PCV3全基因序列,针对PRV gE、PCV2 Rep和PCV3 Rep基因的保守区域,利用Primer 5.0设计3对特异性引物,随后对其扩增条件进行优化,建立能够同时检测PRV、PCV2和PCV3的三重PCR方法.该方法能同时扩增PRV的429 bp、PCV2的273 bp和PCV3的344 bp特异性片段,而对常见的其他猪病原扩增均为阴性.PRV、PCV2和PCV3的最低检出量分别为1 250.0、693.0和91.2拷贝/μL.运用三重PCR和单项PCR检测疑似患有母猪繁殖障碍或呼吸系统疾病的74份临床病料,发现PRV、PCV2和 PCV3的阳性率分别为29.73％(22/74)、71.62％(53/74)和58.11％(43/74),且三重 PCR 与单项 PCR 检测结果的符合率为100％.本试验建立了能够同时检测PRV、PCV2和PCV3的三重PCR检测方法,且该方法具有良好的特异性、灵敏性和准确性,为PRV、PCV2和PCV3的临床诊断和监测提供技术支持.
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