论文部分内容阅读
目的 探讨钙蛋白酶抑制剂ALLN (n-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)与外源性泛素-蛋白酶体片段Ⅱ(UPFⅡ)单用及联用对去血清饥饿大鼠骨骼肌细胞凋亡的影响及机制.方法 离体培养3～5日龄SD大鼠骨骼肌细胞,苏木素-伊红(HE)染色及骨骼肌肌动蛋白免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞,传至5～6代骨骼肌细胞稳定成熟,随机分为5组进行干预:A组(完全培养基对照组)、B组(去血清饥饿对照组)、C组(去血清饥饿+ UPFⅡ组)、D组(去血清饥饿+UPFⅡ+ALLN组)、E组(去血清饥饿+ ALLN组).药物干预72h后,噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞的存活率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组细胞中钙蛋白酶(Calpain)-3、肌肉环指蛋白-1(MuRF-1)、Atrogin-1 的mRNA表达.结果 MTT结果显示:与A组比较,B、C、D、E组细胞存活率分别为(57.89±5.07)％、(41.22±4.87)％、(56.94 ±6.02)％、(69.72±6.25)％,存活率均下降(P＜0.05);FQ-PCR结果显示:与A组比较,B、C、D、E组Calpain-3、MuRF-1、Atrogin-1的mRNA表达量分别为23.71、23.18、22.22倍;24.52、24.10、23.29倍;23.78、23.11、22.15倍;22.60、22.37、21.65倍,差异有统计学意义(P＜0.05);E组细胞存活率较B、C、D组均高(P＜0.05),各基因mRNA表达量均明显降低(P＜0.05);D组细胞存活率较C组高(P＜0.05),各基因mRNA表达量均明显降低(P＜0.05);B组与D组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 适量ALLN在一定程度上能有效降低去血清饥饿诱导大鼠骨骼肌细胞的凋亡率;适量ALLN在一定程度上可以减弱UPFⅡ对去血清饥饿大鼠骨骼肌细胞凋亡的促进作用.