【摘 要】
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本研究旨在揭示肌抑素(MSTN)与基质金属蛋白酶(MMPs)的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响.对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的
【机 构】
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湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,动物胚胎工程与分子育种湖北省重点实验室,武汉430064湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,动物胚胎工程与分子育种湖北省重点实验室,武汉430064;广西大学动物科学技术学
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本研究旨在揭示肌抑素(MSTN)与基质金属蛋白酶(MMPs)的调控关系,探明MSTN对PK15细胞MMP-2/7/9表达的影响.对MSTN单等位基因敲除猪背膘组织进行转录组测序分析,复苏前期制备的MSTN基因敲除PK15细胞系:单等位基因敲除的PK3108细胞系和双等位基因敲除的L18细胞系,通过实时荧光定量PCR和Wesrern blotting分别检测PK15、PK3108和L18细胞系中MSTN、MMP-2/7/9基因的mRNA和蛋白表达水平.结果 发现,与野生型猪相比,MSTN单等位基因敲除猪背膘组织转录因子C/EBPδ、MMP-2/7基因mRNA表达量均极显著下调(P＜0.01);细胞外基质中纤连蛋白(FN)和层连接蛋白(LN)含量均极显著增加(P＜0.01).复苏的PK3108和L18细胞呈现绿色荧光.实时荧光定量PCR结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的mRNA表达量均极显著低于PK15细胞(P＜0.01);Western blotting结果显示,PK3108和L18细胞中MSTN、MMP-2/7/9的蛋白表达量均明显低于PK15细胞.本研究结果表明,在MSTN基因敲除的PK15细胞中,MSTN功能缺失能显著降低MMP-2/7/9的表达,且MMP-2/7/9蛋白表达降低的趋势与MSTN蛋白表达的趋势相一致.
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