【摘 要】
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通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体pPIC9K中.结果表明,TLL脂
【机 构】
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浙江省农业生物资源生化制造协同创新中心 浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室浙江科技学院生物与化学工程学院 杭州310023浙江大学生物系统工程与食品科学学院 杭州310058;浙江省农业生物资源
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通过密码子优化改造编码sn-1,3位置专一性疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)基因,同时通过重叠PCR技术合成该基因,并将其克隆到巴斯德毕赤酵母的表达载体pPIC9K中.结果表明,TLL脂肪酶被高效胞外表达,在摇瓶中发酵168 h得到的发酵液的上清脂肪酶表达量达到0.1 mg/mL,对应的pNPP水解酶活达到312.72U/mL.与对应的原始编码基因重组菌酶活(179.42 U/mL)相比,密码子优化后酶活提高74.29％,表明密码子优化策略成功提高了TLL在巴斯德毕赤酵母中的重组表达.比较毕赤酵母来源的重组TLL与商业化的米曲霉酶学性质发现它们具有相似的最适pH和温度耐受范围.另外,它们在有机溶剂耐受性、表面活性剂和金属离子效应以及位置选择性方面均较为相似,表明毕赤酵母来源的重组TLL同样具有商业化应用的潜力.
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