【摘 要】
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目的:在CRISPR/Cas9基因编辑系统中引入两条不同结合位点的sgRNA共转染FLT3-ITD+AML细胞系MV411获得miR-155基因敲除的MV411细胞,比较单sgRNA转染与双sgRNA转染法进行的miR-155基因敲除的效率及对细胞相关表型的影响.方法:以慢病毒为载体分别构建单转染与双转染的基因敲除细胞,PCR检测基因编辑效率.实时荧光定量PCR法检测miR-155-5p的表达水平.CCK-8法检测细胞增殖能力,并计算细胞对阿霉素与奎扎替尼的药物敏感性.Annexin V-APC/7-AA
【机 构】
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福建医科大学附属协和医院血液科,福建省血液病学重点实验室,福建省血液病研究所,福建福州350001
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目的:在CRISPR/Cas9基因编辑系统中引入两条不同结合位点的sgRNA共转染FLT3-ITD+AML细胞系MV411获得miR-155基因敲除的MV411细胞,比较单sgRNA转染与双sgRNA转染法进行的miR-155基因敲除的效率及对细胞相关表型的影响.方法:以慢病毒为载体分别构建单转染与双转染的基因敲除细胞,PCR检测基因编辑效率.实时荧光定量PCR法检测miR-155-5p的表达水平.CCK-8法检测细胞增殖能力,并计算细胞对阿霉素与奎扎替尼的药物敏感性.Annexin V-APC/7-AAD双染色检测经阿霉素与奎扎替尼诱导的细胞凋亡水平.结果:CRISPR/Cas9可对miR-155的编码基因进行有效编辑,双sgRNA转染细胞可见明显DNA剪接条带.与单sgRNA转染相比,双sgRNA转染中miR-155-5p的表达水平更低,对阿霉素与奎扎替尼具有更低的IC50,更高的药物诱导的细胞凋亡率.结论:双sgRNA转染对miR-155的基因表达的抑制率要高于单sgRNA转染.由双转染基因敲除所引起的细胞抑制增殖、逆转耐药、诱导凋亡等表型更为显著.与单一 sgRNA转染相比,双转染sgRNA是一种高效的基因编辑方案.
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