论文部分内容阅读
目的研究Disulfirum(DS)联合Cu(DS/Cu)对B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞株(nalm6细胞)增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法 CCK8法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6的增殖抑制作用,AnnexinⅤ/PI法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6细胞的诱导凋亡作用,JC-1法检测不同浓度DS/Cu处理nalm6后线粒体膜电位的变化,蛋白质印迹法检测药物处理后线粒体通路相关蛋白(Bcl-2和Bcl-xl)的表达变化。结果 0.5μmol/L Cu作用24h后对nalm6细胞的增殖抑制率为(6.39±4.93)%,与对照组比较差异无统计学意义,t=-2.244,P=0.154。而不同浓度的(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4μmol/L)DS联合0.5μmol/L Cu对nalm6细胞均具有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为(22.29±6.69)%、(48.66±11.58)%、(50.83±12.61)%、(59.24±9.43)%、(62.74±9.17)%、(66.7±7.63)%、(72.13±7.94)%和(77.86±5.43)%,与对照组比较差异均有统计学意义,P值均<0.05;24h的IC50为(0.18±0.08)μmol/L。AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡结果显示,0.5μmol/L Cu作用24h后nalm6细胞的凋亡比例为(7.82±5.13)%,与对照组(8.34±6.23)%比较差异无统计学意义,t=0.112,P=0.916。而不同浓度的DS/Cu对nalm6细胞均具有显著的诱导凋亡作用,0.025、0.05、0.1、0.2和0.5μmol/L的DS联合Cu(0.5μmol/L)作用24h后的凋亡率分别为(17.84±7.68)%、(31.39±5.86)%、(60.41±13.87)%、(69.26±13.29)%和(81.37±12.72)%,与对照组比较差异有统计学意义,P值均<0.05。JC-1法检测线粒体膜电位变化结果显示,单药Cu(0.5μmol/L)组的JC-1多聚体/单体比值为1.12±0.09,与对照组(0.90±0.13)比较差异无统计学意义,t=-2.442,P=0.071。不同浓度的(0.025、0.05、0.1、0.2和0.5μmol/L)DS联合0.5μmol/L Cu组处理nalm6细胞12h后,线粒体膜电位水平明显降低,表现为JC-1多聚体/单体比值随浓度的增加而逐渐降低,分别为1.4±0.32、0.32±0.13、0.14±0.09、0.1±0.02和0.06±0.005,与对照组比较差异有统计学意义,P值均<0.001。蛋白质印迹法显示,DS/Cu处理nalm6细胞12h后能下调Bcl-2及Bcl-xl蛋白的表达。结论 DS/Cu对BALL具有增殖抑制及诱导其凋亡的作用,其作用机制可能是通过线粒体通路实现的。