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目的
观察机械通气新生儿气管导管表面生物膜细菌群落多样性,探讨以变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术为基础的细菌鉴定方法与传统培养法的差异,为临床预防、诊疗细菌性感染提供新思路。
方法以重庆医科大学附属儿童医院新生儿中心2011年10月至2012年3月经治的26例患儿35根气管导管为研究对象,依靠16S rDNA PCR-DGGE技术,通过quantity one软件分析气管导管表面生物膜中细菌群落多样性,通过T-A克隆测序,了解生物膜中细菌种类分布及常见优势菌。
结果35根气管导管经16S rDNA PCR-DGGE所得条带13.8±5.4,香农威纳指数2.42±0.38。16份标本来自7例患儿不同疾病阶段,其中6例患儿气管导管留置天数增加,香农威纳指数减小。6例不同基础疾病患儿的气管导管标本香农威纳指数各不相同。回收24条优势条带克隆测序。35份标本中检出克雷伯菌属100%、假单胞菌属80%、链球菌属77%,91%的标本中存在无法培养的细菌,97%检测到2种以上菌属。80%克雷伯菌属和82%链球菌属中分别与假单胞菌属伴随存在。22例有临床痰培养结果,肺炎克雷伯菌10例(45%),鲍曼不动杆菌2例(9%),阴沟肠杆菌、阴性结果各1例(5%),培养结果均为单菌属。8例痰培养显示"正常菌群",其对应导管上均检测到克雷伯菌等菌属。
结论气管导管表面生物膜中细菌群落具有多样性;16S rDNA PCR-DGGE技术相比培养法更能全面反映气管导管表面细菌群落组成和多样性;克雷伯菌属、假单胞菌属及链球菌属是气管导管表面生物膜中常见菌属,它们在生物膜形成过程中可能存在相互作用。