【摘 要】
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目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对HepG2细胞的增殖抑制作用,通过细胞氧化损伤及能量代谢交互通路的影响阐明其作用机制;并通过与索拉非尼(Sora)联用,探讨其联合用药的可能性.方法:选用HepG2细胞和SW480细胞,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法分别得到DHA与Sora的半数抑制浓度(IC50);Chou-Talalay法分析DHA与Sora联用的联用指数(CI).选用HepG2细胞,分为正常组,DHA单用组(10 μmol·L-1),Sora单用组(5μmol·L-1)和DHA与Sora联用组(D
【机 构】
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中国中医科学院中药研究所,北京100700;中国中医科学院中药研究所,北京100700;中国中医科学院青蒿素研究中心,北京100700
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目的:探讨双氢青蒿素(DHA)对HepG2细胞的增殖抑制作用,通过细胞氧化损伤及能量代谢交互通路的影响阐明其作用机制;并通过与索拉非尼(Sora)联用,探讨其联合用药的可能性.方法:选用HepG2细胞和SW480细胞,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法分别得到DHA与Sora的半数抑制浓度(IC50);Chou-Talalay法分析DHA与Sora联用的联用指数(CI).选用HepG2细胞,分为正常组,DHA单用组(10 μmol·L-1),Sora单用组(5μmol·L-1)和DHA与Sora联用组(DHA 10 μmo1·L-1,Sora 5 μmol· L-1),药物孵育8～12 h后,糖酵解速率试剂盒检测细胞糖酵解功能,线粒体压力试剂盒检测线粒体氧化磷酸化功能;DCFH-DA活性氧(ROS)探针检测细胞内ROS水平变化;脂质过氧化物丙二醛(MDA)检测试剂盒检测细胞内MDA水平变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内血红素氧合酶1(HO-1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)蛋白的水平变化.结果:与正常组比较,DHA单用组能够显著抑制HepG2细胞的线粒体氧化磷酸化ATP合成能力和糖酵解速率(P＜0.01),升高细胞内ROS和MDA水平(P＜0.05),降低HO-1,GCLC水平(P＜0.05);DHA与Sora联用在HepG2和SW480细胞中均具有较好的协同抑制细胞增殖作用,其CI值＜0.9;与DHA单用组比较,DHA与Sora联用组对HepG2细胞的线粒体氧化磷酸化ATP合成和糖酵解的抑制程度均显著增强(P＜0.01);细胞内的ROS和MDA水平均显著升高(P＜0.01);细胞内抗氧化相关蛋白HO-1,GCLC水平均显著降低(P＜0.01).结论:DHA可能通过降低HepG2细胞内的HO-1,GCLC水平,升高ROS使MDA水平增加,并造成细胞线粒体氧化损伤,抑制细胞糖酵解能力以及氧化磷酸化能力,从而抑制HepG2细胞增殖;DHA与Sora联用具有协同抑制HepG2细胞增殖的作用,其机制可能与协同造成细胞氧化损伤从而影响线粒体电子传递链,抑制细胞能量代谢有关.
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