荧光素酶编码基因luc在大肠杆菌中的克隆、表达及纯化

来源 :食品与生物技术学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：zhuyanhua421

【摘要】

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以荧光虫荧光素酶报告载体pXP2 DNA为模板,扩增得到编码萤火虫荧光素酶（LUC）的基因（luc）,构建了诱导型表达载体pQE30-luc。将载体导入E.coliM15获得高效诱导表达萤火虫荧光素酶基

【作者】

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夏蕾饶志明沈微方慧英诸葛健

【机构】

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江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学生物工程学院

【出处】

：

食品与生物技术学报

【发表日期】

：

2008年5期

【关键词】

：

萤火虫荧光素酶克隆表达纯化 firefly luciferase cloing expression purification

【基金项目】

：

基金项目：国家自然科学基金项目（20676053）,国家863计划项目（2006AA020103）,江苏省青年科技创新人才基金项目（BK2006504）,长江学者和创新团队发展计划资助项目（IRT0532）.

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以荧光虫荧光素酶报告载体pXP2 DNA为模板,扩增得到编码萤火虫荧光素酶（LUC）的基因（luc）,构建了诱导型表达载体pQE30-luc。将载体导入E.coliM15获得高效诱导表达萤火虫荧光素酶基因的重组菌M15/pQE30-luc。SDS-PAGE电泳分析显示：重组蛋白的相对分子质量为60 000,表达量占全菌胞内可溶性蛋白质的50.9%.利用表达载体pQE30上的His.Tag标记选用Ni柱纯化表达具有活性的萤火虫荧光素酶（LUC）,纯化后比酶活达到1.43×10^9RFU/mg,纯化

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