【摘 要】
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肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)能选择性诱导肿瘤细胞凋亡.为利用基因工程技术获得重组TRAIL蛋白可溶性片段(sTRAIL),设计1对引物.利用PCR技术特异性扩增出sTRAIL的c
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肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)能选择性诱导肿瘤细胞凋亡.为利用基因工程技术获得重组TRAIL蛋白可溶性片段(sTRAIL),设计1对引物.利用PCR技术特异性扩增出sTRAIL的cDNA,克隆于质粒pGEM-3Zf(-)的EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ位点.经测序证明序列正确后克隆于表达质粒pBV220的EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ位点,转化大肠杆菌DH5α.转化菌株经温度诱导,SDS-PAGE检测和Westem印迹鉴定,获得重组sTRAIL的高水平非融合表达菌株.表达量占菌体总蛋白的20%.对其表达产物进行了初步纯化,SDS-PAGE结果显示纯度可达90%以上.用L929细胞测定其生物学活性表明,重组蛋白在体外能明显诱导肿瘤细胞凋亡.
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