【摘 要】
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目的:观察Bmi-1基因沉默对白血病耐药细胞株K562/ADR耐药性的影响并初步探讨其机制.方法:将2种序列的Bmi-1小干扰RNA SiRNA转染到耐药细胞K562/ADR,检测Bmi-1基因mRNA和蛋白
【机 构】
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大连医科大学检验医学院临床血液学教研室,辽宁大连116044徐州医学院附属市立医院检验科,江苏徐州221005;
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目的:观察Bmi-1基因沉默对白血病耐药细胞株K562/ADR耐药性的影响并初步探讨其机制.方法:将2种序列的Bmi-1小干扰RNA SiRNA转染到耐药细胞K562/ADR,检测Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达以确定转染效果.检测Bmi-1基因沉默后耐药蛋白P-gp及其编码基因MDR1的表达情况,并采用流式细胞术检测细胞内阿霉素蓄积情况.检测Bmi-1基因沉默后NF-κB蛋白的表达变化;应用NF-κB抑制剂PDTC处理K562/ADR细胞抑制NF-κB活性后,检测P-gp蛋白的表达及其功能的变化.检测Bmi-1基因沉默后PTEN、AKT和p-AKT蛋白表达的变化.应用PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理K562/ADR细胞抑制p-AKT表达后,检测NF-κB和P-gp蛋白的表达.应用PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默后的细胞,检测AKT、p-AKT、NF-κB和P-gp蛋白的表达.以上mRNA表达用RT-PCR法检测,蛋白表达用Western blot法检测.结果:在mRNA水平和蛋白水平2种序列的小干扰RNA均使K562/ADR细胞Bmi-1基因表达降低.MDR1/P-gp在Bmi-1 siRNA干扰细胞中的表达明显低于在K562/ADR细胞的表达(P＜0.05);干扰后细胞内阿霉素蓄积增多.Bmi-1基因沉默后,细胞NF-κB活性降低;NF-κB抑制剂抑制NF-κB活性后,K562/ADR细胞P-gp蛋白表达及药物泵出功能被抑制.Bmi-1基因沉默后PTEN蛋白表达增高,而p-AKT蛋白表达明显降低(P＜0.05).PI3K/AKT通路抑制剂LY294002抑制p-AKT表达后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达明显下降(P＜0.05).PTEN抑制剂BPV(phen)处理Bmi-1基因沉默细胞后,NF-κB活性和P-gp蛋白表达得到重塑.结论:Bmi-1在MDR1/P-gp介导的K562/ADR细胞多药耐药中起关键作用,这种作用可能是通过激活PTEN/AKT途径调控NF-κB完成.
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