【摘 要】
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目的采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,引起线粒体功能的变化,借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响。方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组],阴性对照组[非特异性siRNA(NC siRNA)组]和空白对照组(BC siRNA组)。荧光分光光度法检测半胱天冬酶(caspase-3)活性以反
【机 构】
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325000温州医学院附属第一医院心内科温州医学院心血管生物和基因研究所,325000温州医学院附属第一医院心内科温州医学院心血管生物和基因研究所,325000温州医学院附属第一医院心内科温州医学院心
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目的采用RNA干扰技术选择性下调大鼠心肌细胞中转录因子Pax-8的表达,引起线粒体功能的变化,借此探讨线粒体对心肌细胞凋亡的影响。
方法将H9C2(2-1)大鼠胚胎心肌细胞分为3组:实验组[针对Pax-8基因的小干扰RNA(Pax-8 siRNA)组],阴性对照组[非特异性siRNA(NC siRNA)组]和空白对照组(BC siRNA组)。荧光分光光度法检测半胱天冬酶(caspase-3)活性以反映细胞凋亡,RT-PCR测定B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl2)和其同源类似物Bax的mRNA表达,Western blot测定Bcl2、Bax和胞浆细胞色素C(Cyto)的蛋白表达,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm,用JC-1单体/聚合物比值来衡量线粒体去极化的比例,比值越大,ΔΨm越低)。
结果Pax-8 siRNA组心肌细胞caspase-3活性(0.167±0.012)明显高于NC siRNA组(0.075±0.021)和BC siRNA组(0.072±0.019),P均<0.05。Pax-8 siRNA组Bcl2 mRNA和蛋白的表达水平(分别为0.61±0.06和0.94±0.11)明显低于NC siRNA组(分别为0.90±0.070和1.39±0.15)和BC siRNA组(分别为0.94±0.09和1.49±0.20),P均<0.05。Pax-8 siRNA组Bax mRNA和蛋白表达水平(分别为1.05±0.10和1.25±0.12)明显高于NC siRNA组(分别为0.72±0.03和0.99±0.12)和BC siRNA组(分别为0.64±0.03和0.92±0.06),P均<0.05。Pax-8 siRNA组心肌细胞线粒体释放Cyto至胞浆的量(0.75±0.14)明显高于NC siRNA组(0.51±0.06)和BC siRNA组(0.48±0.07),P均<0.05。Pax-8 siRNA组JC-1单体/聚合物比值(0.163±0.011)明显高于NC siRNA组(0.092±0.015)和BC siRNA组(0.072±0.025), P均<0.05,提示ΔΨm明显低于NC siRNA组和BC siRNA组(P均<0.05)。NC siRNA 组与BC siRNA组上述指标比较,差异均无统计学意义。
结论Pax-8基因干扰心肌细胞,促进了心肌细胞的凋亡,线粒体参与了心肌细胞凋亡,推测心肌细胞的凋亡可能是通过线粒体途径实现的。
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